Фармакопея | pharmacopeia.ru | Том 2

Присутствие в генно-инженерных продуктах, а также некоторых

высокоочищенных  биотехнологических  препаратах  солей  в  высоких
концентрациях  (более  0,1М)  может  искажать  градиент  рН  и  форму
сфокусированных  белков.  Для  нейтрализации  этого  эффекта  образцы  лучше
готовить  в  деионизованной  воде,  1

−

2 % растворе глицина или амфолитов

(амфолины, фармалиты, сервалиты, биолиты). При необходимости для
пробоподготовки возможно использование специальных центрифужных
концентраторов (фильтров), диализа или гель-фильтрации.

Время завершения процесса изофокусирования в полиакриламидных

гелях, как правило, определяют по предварительно окрашенным стандартным
белкам - маркерам (например, гемоглобину), нанесенным на гель в различные
точки  одновременно  с  исследуемыми  образцами.  Процесс  считается
завершенным в том случае, если все стандартные образцы образуют полосы в
установленном  месте.  Если  завершение  процесса  изофокусирования
определяют  по  времени,  прошедшему  с  момента  нанесения  образцов,
установленное время должно быть обосновано.

Метод изоэлектрического фокусирования может быть применен:

−

для

подтверждения

подлинности,

когда

подвижность

испытуемого образца сравнима с подвижностью стандартного образца или
маркера pI;

−

для оценки примесей по интенсивности окрашивания полос

относительно основных компонентов по сравнению со стандартным
образцом;

−

для количественного определения по интенсивности окраски

полос с помощью денситометра или аналогичного оборудования.

Допустимое различие подвижности испытуемого и стандартного

образцов при оценке подлинности должно быть указано в нормативной
документации. Для количественного определения примеси или основного