background image

Присутствие  в  генно-инженерных  продуктах,  а  также  некоторых 

высокоочищенных  биотехнологических  препаратах  солей  в  высоких 
концентрациях  (более  0,1М)  может  искажать  градиент  рН  и  форму 
сфокусированных  белков.  Для  нейтрализации  этого  эффекта  образцы  лучше 
готовить  в  деионизованной  воде,  1

2  %  растворе  глицина  или  амфолитов 

(амфолины,  фармалиты,  сервалиты,  биолиты).  При  необходимости  для 
пробоподготовки  возможно  использование  специальных  центрифужных 
концентраторов (фильтров), диализа или гель-фильтрации. 

Время  завершения  процесса  изофокусирования  в  полиакриламидных 

гелях, как правило, определяют по предварительно окрашенным стандартным 
белкам - маркерам (например, гемоглобину), нанесенным на гель в различные 
точки  одновременно  с  исследуемыми  образцами.  Процесс  считается 
завершенным в том случае, если все стандартные образцы образуют полосы в 
установленном  месте.  Если  завершение  процесса  изофокусирования 
определяют  по  времени,  прошедшему  с  момента  нанесения  образцов, 
установленное время должно быть обосновано. 

Метод изоэлектрического фокусирования может быть применен: 

 

для 

подтверждения 

подлинности, 

когда 

подвижность 

испытуемого  образца  сравнима  с  подвижностью  стандартного  образца  или 
маркера pI; 

 

для  оценки  примесей  по  интенсивности  окрашивания  полос 

относительно  основных  компонентов  по  сравнению  со  стандартным 
образцом; 

 

для  количественного  определения  по  интенсивности  окраски 

полос с помощью денситометра или аналогичного оборудования. 

Допустимое  различие  подвижности  испытуемого  и  стандартного 

образцов  при  оценке  подлинности  должно  быть  указано  в  нормативной 
документации.  Для  количественного  определения  примеси  или  основного 

2935