background image

ОФС.1.7.2.0022.15 

Определение подлинности и чистоты 
биологических лекарственных 
препаратов методом вестерн-блот 

Настоящая  общая  фармакопейная  статья  распространяется  на  метод 

вестерн-блот, один из вариантов иммуноблоттинга, который используют для 
оценки  подлинности  и  чистоты  биологических  лекарственных  препаратов 
(БЛП)  на  основе  высокоочищенных  белков,  в  том  числе,  полученных  по 
технологии рекомбинантной ДНК.  

На  первом  этапе  проводят  электрофорез  в  полиакриламидном  геле  с 

натрия  додецилсульфатом  (так  называемый,  SDS-PAGE  электрофорез)  для 
разделения белков. Затем белки переносят на нитроцеллюлозную мембрану 
или  PVDF-мембрану  (мембрана  из  поливинилденфторида).  Детекцию 
проводят  с  помощью  специфичных  к  определяемому  белку  антител, 
конъюгированных с щелочной фосфатазой или пероксидазой хрена (прямой 
вариант  ИФА)  или  последовательно  с  помощью  первых  антител  к 
определяемому белку и вторых антител (так называемой, антиглобулиновой 
сыворотки),  специфичных  к  иммуноглобулину  первых  антител, 
конъюгированных  с  щелочной  фосфатазой  или  пероксидазой  хрена 
(непрямой вариант ИФА).  

В  данной  ОФС  изложен  метод  детекции  на  основе  цветной  реакции, 

как один из наиболее широко применяемых в настоящее время. Для детекции 
также могут быть использованы хемилюминесцентный метод, в том числе, с 
усилением  хемилюминесценции,  и  методы  радиоактивной  или 
флуоресцентной меток (РИА или РИФ).  

Предыдущая <  | 2943  | > Следующая  | Главная  | pharma-14@mail.ru |  pharmacopeia.ru | Скачать в PDF