Фармакопея | pharmacopeia.ru | Том 2

Испытание проводят с фармацевтическими субстанциями или с

готовой продукцией.

При оценке подлинности, на этапе выполнения электрофореза, помимо

испытываемых образцов, должно быть предусмотрено внесение в лунки геля
следующих  растворов:  отрицательный  контрольный  образец  (1-кратный
буфер  для  приготовления  образцов),  смесь  маркеров  молекулярных  масс
(рекомендуется  использование  предварительно  окрашенных  маркеров
молекулярных  масс),  стандартный  образец  испытываемого  белка  (при  его
наличии),  аттестованный  в  установленном  порядке.  При  оценке  чистоты
(примесей) дополнительно  должно быть  предусмотрено  внесение  образца  с
концентрацией  белка,  соответствующей  пределу  обнаружения  или
количественного  определения  примеси  (в  зависимости  от  назначения
методики)  и установленной на основании результатов валидации методики.
При оценке чистоты необходимо сравнение результатов блота с результатами
электрофореза  в  полиакриламидном  геле;  методика  должна  выявлять  1  %
примеси.

Методика
Для разделения белков по их молекулярным массам предварительно

проводят электрофорез в соответствии с методикой, изложенной в ОФС
«Электрофорез» и ОФС «Электрофорез в полиакриламидных гелях».

Для проведения переноса белков используют прибор для переноса

белков. Все работы проводят в резиновых перчатках. Объем всех
используемых растворов должен быть достаточен для полного погружения
мембраны, на которую переносят белки.

После проведения электрофореза для подготовки геля к

иммуноблотингу,  его  заливают  буферным  раствором  для  переноса  белков
(если  нет  других  указаний  в  фармакопейной  статье  или  нормативной
документации), ставят на орбитальный шейкер и выдерживают в течение 10-
15 мин. Затем подготавливают лист нитроцеллюлозной или PVDF-мембраны,
соответствующий  размеру  геля.  При  использовании  нитроцеллюлозной