background image

2  мл  испытуемого  раствора  центрифугируют  при  3500  об/мин  при 

температуре 4 – 5 

0

С   в течение 30 мин.  Надосадочную  жидкость удаляют, 

осадок  промывают  2  мл  воды  очищенной  и  центрифугируют  в  тех  же 
условиях. Затем надосадочную жидкость вновь удаляют. 

К  осадку  прибавляют  0,4  мл  0,1  М  раствора  натрия  гидроксида, 

перемешивают, выдерживают при комнатной температуре в течение 30 мин, 
затем  прибавляют  2  мл  реактива  В  и  вновь  перемешивают.  Через  10  мин 
прибавляют  0,2  мл  фосфорномолибденово-вольфрамового  реактива.  Смесь 
перемешивают и центрифугируют при температуре 4 – 5 

0

С при 3500 об/мин 

в  течение 20  мин. Надосадочную  жидкость сливают  в  пробирку  и  через 10 
мин  измеряют  оптическую  плотность  по  методике,  указанной  в  ОФС 
«Определение белка» (метод Лоури, метод А). 

В  качестве  контрольного  раствора  используют  2  мл  воды  очищенной 

или  буферного  раствора,  указанного  в  фармакопейной  статье  или 
нормативной  документации,  прибавляют  0,4  мл  0,1М  раствора  натрия 
гидроксида, 2 мл реактива В и 0,2 мл фосфорномолибденово-вольфрамового 
реактива. 

Содержание  белка  рассчитывают  по  калибровочному  графику,  как 

указано в методе I. 

Построение  калибровочного  графика

.  К  0,1;  0,2;  0,3;  0,4  мл, 

(концентрация белка: 0,02; 0,04; 0,06; 0,08 мг/мл соответственно) добавляют 
воду  очищенную  до  объема  0,4  мл  перемешивают,  добавляют  2,0  мл 
фосфорномолибденово-вольфрамового  реактива  и  вновь  перемешивают. 
Далее  определение  проводят по  методике,  указанной  в  ОФС  «Определение 
белка» (Метод Лоури, Метод А). 

Примечания  
     Испытуемый  раствор.  2  мл  испытуемого  раствора  с  содержанием 

белка от 0,01 до 0,02 мг/мл. 

     Приготовление  стандартного  раствора  указано  в  методе  I.  При 

определении  белка  в  сорбированных  препаратах  в  фармакопейной 

2955