Фармакопея | pharmacopeia.ru | Том 2

2 мл испытуемого раствора центрифугируют при 3500 об/мин при

температуре 4 – 5

С в течение 30 мин. Надосадочную жидкость удаляют,

осадок промывают 2 мл воды очищенной и центрифугируют в тех же
условиях. Затем надосадочную жидкость вновь удаляют.

К осадку прибавляют 0,4 мл 0,1 М раствора натрия гидроксида,

перемешивают, выдерживают при комнатной температуре в течение 30 мин,
затем прибавляют 2 мл реактива В и вновь перемешивают. Через 10 мин
прибавляют 0,2 мл фосфорномолибденово-вольфрамового реактива. Смесь
перемешивают и центрифугируют при температуре 4 – 5

С при 3500 об/мин

в течение 20 мин. Надосадочную жидкость сливают в пробирку и через 10
мин измеряют оптическую плотность по методике, указанной в ОФС
«Определение белка» (метод Лоури, метод А).

В качестве контрольного раствора используют 2 мл воды очищенной

или буферного раствора, указанного в фармакопейной статье или
нормативной документации, прибавляют 0,4 мл 0,1М раствора натрия
гидроксида, 2 мл реактива В и 0,2 мл фосфорномолибденово-вольфрамового
реактива.

Содержание белка рассчитывают по калибровочному графику, как

указано в методе I.

Построение калибровочного графика

. К 0,1; 0,2; 0,3; 0,4 мл,

(концентрация белка: 0,02; 0,04; 0,06; 0,08 мг/мл соответственно) добавляют
воду  очищенную  до  объема  0,4  мл  перемешивают,  добавляют  2,0  мл
фосфорномолибденово-вольфрамового  реактива  и  вновь  перемешивают.
Далее  определение  проводят по  методике,  указанной  в  ОФС  «Определение
белка» (Метод Лоури, Метод А).

Примечания
Испытуемый раствор. 2 мл испытуемого раствора с содержанием

белка от 0,01 до 0,02 мг/мл.

Приготовление стандартного раствора указано в методе I. При

определении белка в сорбированных препаратах в фармакопейной