background image

 Испытание  клеточных  культур  адаптированных  к  суспензионному 

культивированию, вирусных штаммов, вирусных сборов, и других вирусных 
суспензий  на  присутствие  микоплазм  проводят  с  использованием 
индикаторной клеточной культуры, как правило, после нейтрализации вируса 
специфической  иммунной  сывороткой,  не  обладающей  ингибирующим 
действием  в  отношении  микоплазм.  Также  может  быть  использована 
клеточная культура не чувствительная к размножению вируса.  

Методика испытания методом индикаторной клеточной культуры 

(цитохимическим методом) 

Испытание  на  присутствие  микоплазм  методом  индикаторной 

клеточной  культуры  проводят  в  асептических  условиях,  выполняя 
следующие операции. 

1.

 

В  стерильную  чашку  Петри  (диаметр  90  мм)  помещают 

предварительно  подготовленное  предметное  стекло  и  вносят  20–23  мл 
суспензии  клеточной  культуры  Vero  в  питательной  среде  Игла  МЕМ  или 
ДМЕМ  в  концентрации  не  более  10

5

  кл/мл  и  добавляют  не  более  5  % 

сыворотки  крови  плодов  коровы,  предварительно  прошедшей  контроль  на 
стерильность и отсутствие контаминации микоплазмами. 

2.

 

Вносят 1,0 мл испытуемого образца в чашку Петри с клеточной 

суспензией культуры Vero и инкубируют в течение 3–5 сут при температуре 
(36  ±  1) 

о

С  в  атмосфере  с  (5,0±0,5)  %  СО 

2

  до  формирования  50-70  % 

монослоя.  Образование  монослоя  наблюдают  в  световом  микроскопе  при 
увеличении ок.10×, об.20×. 

3.

 

По  достижении  50-70  %  клеточного  монослоя  культуральную 

жидкость  сливают,  осторожно  промывают  стекло  фосфатным  буферным 
раствором (рН 7,2-7,4), используя не менее 100мл. 

4.

 

Помещают  предметное  стекло  на  30–35  мин  в  96

о

  этиловый 

спирт. 

3006