Фармакопея | pharmacopeia.ru | Том 2

Спирт сливают и сушат предметное стекло с клеточным

монослоем на воздухе.

Окрашивают предметное стекло с клеточным монослоем рабочим

раствором красителя Hoechst-33258 в защищенном от света месте при
температуре (36 ± 1)

С в течение 30–35 мин.

Краситель сливают, предметное стекло с монослоем промывают

стерильной водой очищенной, используя не менее 100мл, подсушивают на
воздухе и просматривают в люминесцентном микроскопе.

Учет и интерпретация результатов испытания методом

индикаторной клеточной культуры (цитохимическим методом)

Учет результатов испытания на присутствие микоплазм методом

индикаторной  клеточной  культуры  (цитохимическим  методом)  проводят
путем  исследования  приготовленных  на  стекле  препаратов  в
люминесцентном  микроскопе.  Микоплазмы  преимущественно  выявляются
по  границам  клеток  и  в  межклеточном  пространстве  в  виде  мелкой  ярко
светящейся зернистости на фоне темной, не имеющей свечения цитоплазмы.
Микроскопически  микоплазмы  выглядят  как  однородно  окрашенные  тела
сферической   формы    диаметром  0,1-0,3  мкм,

в виде парных, цепочечных,

нитевидных образований с яркой зеленоватой флюоресценцией.

При учете результатов положительными контрольными образцами

могут  служить  готовые  контрольные  препараты  или  контаминированные
микоплазмами культуры клеток, а отрицательными - клеточные культуры, в
которых  микоплазмы  не  выявлены  или  готовые  контрольные  препараты.
Сравнительные  исследования  микроскопической  картины  испытуемого
образца с микроскопическими картинами положительного и отрицательного
контроля  позволяют  идентифицировать  флюоресценцию  микоплазм  -
контаминантов испытуемого материала.