Фармакопея | pharmacopeia.ru | Том 2

стадия  разделения  иммунных  комплексов  от  непрореагировавших
компонентов (отмывка), которые находятся в разных фазах (образовавшиеся
иммунные  комплексы  находятся  на  твердой  фазе,  а  непрореагировавшие
комплексы  –  в  растворе).  Гетерогенные  методы,  в  которых  формирование
иммунных  комплексов  на  первой  стадии  протекает  на  твердой  фазе,
называют твердофазными методами.

Методы относятся к гомогенно-гетерогенным, если 1 стадия –

образование специфических комплексов – происходит в растворе, а затем для
разделения компонентов используют твердую фазу с иммобилизированным
реагентом.

Метод гетерогенного ИФА состоит из 3 основных этапов:
1)

иммобилизация антигена или антитела на твердой фазе,

полученный комплекс называется иммуносорбентом;

удаление несвязавшегося реагента и блокирование сайтов

связывания на твердой подложке с помощью блокирующих белков, таких,
например, как альбумин, казеин; инкубация анализируемого препарата с
иммуносорбентом для того, чтобы произошло их связывание;

3) детекция благодаря ферментативной активности самого

исследуемого  вещества  или  благодаря  связанной  с  анализируемым
препаратом  ферментативной  метке  (прямой  вариант).  В  некоторых  случаях
производится  дополнительная  инкубация  комплекса  «иммуносорбент–
исследуемое  вещество»  с  вторичными  антителами,  конъюгированными  с
ферментативной меткой (непрямой вариант).

Количественное определение исследуемого вещества осуществляется

путем добавления подходящего для используемого детектора субстрата и
сравнения сигнала исследуемого вещества со стандартным образцом.

Метод гетерогенного ИФА подразделяют на неконкурентный ИФА и

конкурентный ИФА. Схемы анализа могут быть модифицированы в процессе
разработки лекарственного препарата в соответствии с необходимыми
требованиями. Изменения должны быть указаны в фармакопейной статье или