background image

Наиболее  распространенным  неконкурентным  методом  является 

«сэндвич»  метод.  При  его  выполнении  на  твердой  фазе  иммобилизуют 
первичные  антитела  с  их  последующей  блокировкой.  Затем  к  ним 
прибавляют  исследуемое  вещество,  содержащее  антиген,  и  инкубируют. 
После  инкубации  комплекс  антиген–антитело  отмывают  от  несвязавшегося 
антигена и добавляют вторичные антитела, меченные ферментом, и проводят 
детекцию.

 

Конкурентный метод ИФА 

Конкурентный метод ИФА подразделяется на несколько видов: по типу 

детекции (прямой конкурентный, косвенный (непрямой) конкурентный) и по 
типу иммобилизованного на твердой фазе вещества (антиген или антитело).  

Прямой конкурентный вариант ИФА 

Для  обнаружения  или  количественного  определения  растворимых 

антигенов  применяют  прямой  конкурентный  вариант  ИФА  с 
иммобилизованным  на  твердой  фазе  антигеном.  Для  этого  используют 
антиген-специфические  антитела,  конъюгированные  с  соответствующим 
детектором (например, пероксидаза хрена, щелочная фосфатаза, рутений или 
флуоресцеин).  На  твердую  фазу  иммобилизуют  стандартный  антиген  с 
последующей  блокировкой.  Конъюгированное  с  ферментативной  меткой 
антитело инкубируют с исследуемым веществом  (растворимым  антигеном). 
Затем  эту  смесь добавляют  к иммобилизованному  антигену,  инкубируют,  а 
потом  отмывают  от  несвязавшегося  комплекса  антиген–антитело. 
Следующий  шаг  заключается  в  добавлении  подходящего  субстрата  для 
используемого  в  качестве  метки  фермента.  Ингибирование  реакции, 
обусловленное  наличием  2  антигенов  в  системе,  по  сравнению  с 
контрольным образцом  без  конкурентного растворимого  антигена,  является 
обратно пропорциональным значению количества исследуемого вещества.  

Выполнение 

прямого 

конкурентного 

варианта 

ИФА 

с 

иммобилизованным  на  твердой  фазе  антителом  аналогично  прямому 
конкурентному  ИФА  с  иммобилизованным  на  твердой  фазе  антигеном, 

Предыдущая <  | 3018  | > Следующая  | Главная  | pharma-14@mail.ru |  pharmacopeia.ru | Скачать в PDF