Фармакопея | pharmacopeia.ru | Том 2

детекции также должны быть указаны в фармакопейной статье и
нормативной документации.

Примеры методик для некоторых видов ИФА

Косвенный неконкурентный метод ИФА

I. Сорбция антигена.

В каждую лунку 96-луночного планшета вносят

0,1-0,5 мкг антигена и 100 мкл 0,05 М карбонат-бикарбонатного буферного
раствора (рН 9,6), если нет других указаний в фармакопейной статье или
нормативной документации, и далее проводят сорбцию при температуре 4

С  в  течение  16  ч.  Возможно  использование  других  буферных  растворов  с
высокими  значениями  pH.  Инкубация  проводится  при  встряхивании  на
горизонтальном шейкере для планшетов.

Отмывка

(двукратная)

несвязавшихся

молекул

антигена

осуществляется фосфатно-солевым буферным раствором (pH 9,0),
содержащим 0,1 % твин-20 (по 300 мкл на лунку), если нет других указаний в
фармакопейной статье или нормативной документации.

II. Блокировка.

Для блокирования мест неспецифического связывания

антигенов  или  антител  лунки  планшета  заполняют  фосфатно-солевым
буферным раствором (pH 9,0) или другим буферным раствором, указанным в
фармакопейной  статье  или  в  нормативной  документации,  содержащим  1%
раствор  бычьего  сывороточного  альбумина  или  других  белков  (казеина,
желатина,  сухого  молока  и  др.),  и  инкубируют  в  течение  10–15  мин  при
комнатной  температуре  (если нет других указаний в фармакопейной статье
или нормативной документации).

III. Титрование специфических антител.

При необходимости

количественной оценки исследуемое вещество (антиген или антитело)
титруют в серийных разведениях параллельно со стандартным образцом (СО).

Титрование можно проводить как в горизонтальных, так и в

вертикальных рядах планшета. Необходимо отметить, что титрование
антител проводится в том случае, если необходимо подобрать оптимальную
концентрацию антител или определить их титр. В том случае, если