background image

оптимальная  концентрация  и/или  титр  антител  определены,  то  используют 
рекомендованное для данных антител (сыворотки) разведение.  

При  титровании  в  первую  лунку  ряда  вносят  готовое  разведение 

антител – в среднем 1–10 мкг на лунку, далее производят последовательное 
разведение  антител  в  лунках.  Инкубацию  со  специфическими  антителами 
проводят в течение 30 мин при комнатной температуре при встряхивании на 
горизонтальном шейкере для планшетов.  

Отмывка  осуществляется  не  менее  3–4  раз  с  помощью  фосфатно-

солевого буферного раствора pH 9,0, содержащего 0,1% твин-20.  

IV. 

Добавление 

антивидовых 

(антиглобулиновых) 

антител, 

конъюгированных  с  ферментной  меткой. 

В  качестве  детекторных 

(вторичных)  антител  используются  антивидовые  поликлональные  антитела, 
конъюгированные с ферментативной меткой. Чаще всего используются козьи 
или  кроличьи  антитела,  специфичные  к  целой  молекуле  или  к  Fc- 
фрагментам специфических антител. Концентрация детекторных антител, как 
правило, указывается производителем в виде разведения исходного раствора 
(например, 1:1000).  

Инкубация с вторичными мечеными антителами проводится в течение 

30  мин  при  комнатной  температуре  при  встряхивании  на  горизонтальном 
шейкере для планшетов. 

Отмывка  осуществляется  не  менее  3–4  раз  с  помощью  фосфатно-

солевого буферного раствора (pH 9,0), содержащего 0,1 % твин-20.  

Инкубация проводится в течение 10 мин при комнатной температуре и 

встряхивании на горизонтальном шейкере для планшетов.  

V.  Проведение  ферментативной  реакции,  сопровождающейся 

появлением  окрашенного  продукта. 

В  лунки  вносят  по  100  мкл  раствора 

субстрата  и  инкубируют  в  течение  10  мин  при  комнатной  температуре  и 
постоянном  перемешивании.  Для  остановки  ферментативной  реакции 
применяют  «стоп  реагент»,  который  добавляют  во  все  исследуемые  и 

Предыдущая <  | 3021  | > Следующая  | Главная  | pharma-14@mail.ru |  pharmacopeia.ru | Скачать в PDF