background image

Подготовка  белка  к  гидролизу,  в  т.ч.  этап  выделения  и  очистки 

являются  обязательными  при  проведении  испытания  нерасфасованных  или 
дозированных  форм  лекарственных  средств,  содержащих  белки,  в  тех 
случаях,  когда  они  содержат  мешающие  испытанию  вспомогательные 
вещества или белковые носители.  

Количественное  извлечение  белка  из  дозированной  формы  должно 

быть валидировано. 

В  зависимости  от  размера,  конфигурации  белка,  а  также  состава 

лекарственного  средства  и  готовой  лекарственной  формы,  используются 
различные подходы в подготовке белка к гидролизу. 

В  некоторых  случаях  может  быть  необходимо  концентрирование 

образца  либо  отделение  белка  от  используемых  в  готовой  лекарственной 
форме  сопутствующих  веществ  и  стабилизаторов,  которые  могут  искажать 
результаты картирования.  

Для обеспечения полного доступа фермента к местам разрыва связей во 

многих случаях необходимо сократить число дисульфидных связей путем их 
восстановления  и  алкилирования,  а  так  же  использовать  частичную 
денатурацию  белка  добавлением  соответствующих  агентов.  В  качестве 
восстанавливающих  агентов  возможно  использование,  например, 
дитиотрейтола  или  меркаптоэтанола,  для  алкилирования  йодацетамида,  4-
винилпиридина,  йодуксусной  кислоты,  для  денатурирования  мочевины,  и 
гуанидина. 

Физические  методы  выделения  и  очистки  белка  с  использованием 

колоночной  хроматографии,  диализа,  ультрафильтрации,  лиофилизации 
могут  использоваться  в  ходе  подготовки  белка  к  гидролизу  наряду  с 
восстановлением, алкилированием и денатурацией или как самостоятельные 
процедуры.   

Очистка белка от низкомолекулярных компонентов, входящих в состав 

лекарственного  средства  или  лекарственного  препарата  может  проводиться 
различными  методами.  Наиболее  часто  используются  следующие  способы, 

3037