Фармакопея | pharmacopeia.ru | Том 2

рН реакционной среды

. Значение рН смеси, в которой осуществляется

расщепление  пептида,  определяется  эмпирически  и  направлено  на
оптимизацию  состояния  расщепляющего  реагента.  Например,  при
использовании  при  использовании  трипсина  в  качестве  расщепляющего
агента  оптимальной  является  слабощелочная  среда  (рН  8),  применение
цианобромида  в  качестве  расщепляющего  реагента  требует  создания
сильнокислой  среды  (например,  рН  2,  за  счёт  использования  муравьиной
кислоты).  Главным  является  требование,  что  бы  значение  рН  реакционной
среды  не  изменяло  структуру  белка  в  ходе  реакции  расщепления  и  не
изменялось в ходе проведения гидролиза.

Температура

. Для большинства реакций расщепления наиболее

подходящей является температура в интервале от 25 °С до 37 °С.

Создаваемая температура должна способствовать минимизации

побочных химических реакций. Тип протеина, подвергаемого расщеплению,
определяет  выбор  температуры  реакционной  среды,  поскольку  некоторые
белки  с  повышением  температуры  склонны  к  денатурации.  Например,
расщепление  рекомбинантного  бычьего  соматропина  проводится  при
температуре 4 °С, поскольку при более высокой температуре он осаждается в
ходе проведения реакции расщепления.

Время.

Время проведения гидролиза оказывает существенное влияние

на получаемую пептидную карту, поэтому

следует установить оптимальное

время для получения воспроизводимой карты, с одной стороны, и
достаточное для проведения полного расщепления, с другой. Время
расщепления варьируется от 2 ч до 30 ч.

Реакция гидролиза прекращается либо прибавлением кислоты или

других веществ, которые не оказывают влияния на получаемую пептидную
карту либо замораживанием. Наиболее часто используются растворы
трифторуксусной кислоты, меркаптоэтанол.

Количество используемого расщепляющего реагента

. Для обеспечения

достаточного быстрого расщепления (от 6 ч до 20 ч) используется