Фармакопея | pharmacopeia.ru | Том 2

Наиболее часто хроматографическое разделение пептидных

фрагментов, полученных в результате гидролиза осуществляется на
колонках, заполненных сорбентами на основе гидрофобных силикагелей с
привитыми группами С18, С8, С4 или иными сорбентами, с размером частиц
от 3 нм до 10 мкм или 1,7-2,5 мкм (при использовании ультраэффективной
жидкостной хроматографии) и размером пор от 130 до 300 А.

Подвижная фаза.

Подвижную фазу выбирают исходя из свойств

испытуемого  образца,  типа  сорбента  колонки  и  метода  детектирования.
Наиболее  часто  в  качестве  подвижной  фазы  используются  вода  и
ацетонитрил  в  качестве  органического  модификатора  с  добавлением  0,1 %
кислоты  трифторуксусной.  При  необходимости,  для  повышения
растворимости  компонентов  смеси,  могут  прибавлятся  1-пропанол,  2-
пропанол  или  другие  модификаторы.  Прибавление  спиртов  не  должно
приводить к чрезмерному повышению вязкости компонентов.

Подвижная фаза, содержащая фосфатный буфер, может быть

использована  в  случаях,  когда  необходимо  увеличить  разделяющую
способность  системы,  поскольку  изменение  рН  в  интервале  от  3,0  до  5,0
улучшает  разделение  пептидов,  содержащих  кислотные  остатки  (например,
глутаминовая и аспарагиновая кислоты). Натрия или калия фосфаты, ацетат
аммония, фосфорная кислота при значении рН между 2 и 7 (или выше при
использовании полимерного наполнителя) используются с ацетонитрильным
градиентом.

Растворители

В качестве растворителей используются различные буферные

растворы.

Способ элюирования.

В большинстве случаев применяется градиентное элюирование,

поскольку позволяет достичь эффективного и быстрого разделения
пептидных фрагментов, представляющих собой сложные смеси различного
состава обладающих различными свойствами