серию  последовательных  разведений  стандарта  образца  фактора  VII  в 
интервале  от  0,3  до  1  МЕ/мл.  Препарат  разводят  до  концентрации  менее  1 
МЕ/мл.  Анализируют  3  разведения  препарата.  Для  каждого  образца 
измерение  времени  свертывания  проводят  минимум  2  раза.  Измерение 
проводят непосредственно после разведения препарата. 

Анализ проводят при температуре (37±0,5)°С. В пластиковую пробирку 

вносят  50  мкл  плазмы,  дефицитной  по  фактору  VII  и  50  мкл  разведения 
стандарта или препарата. Смесь инкубируют при (37±0,5)°С в течение 120 – 
240 с. Время свертывания определяют с момента добавления к смеси 200 мкл 
предварительно  прогретого  до  температуры  (37±0,5)°С  кальция 
тромбопластина.  В  зависимости  от  техники  постановки  анализа  объемы 
реагентов могут варьироваться в соответствующей пропорции. 

Калибровочный  график  строят  в  полулогарифмических  координатах. 

По логарифмической оси абсцисс откладывают значения активности фактора 
VII,  по  оси  ординат  –  время  свертывания  соответствующих  разведений 
стандарта.  Активность  фактора  VII  для  каждого  разведения  испытуемого 
образца  находят  по  калибровочному  графику.  Активность  FVII  (

А

)  в 

исследуемом образце рассчитывают по формуле: 

k

A

A

x

⋅

=

, 

где 

x

A

−

 активность соответствующего разведения исследуемого образца, 

найденная по калибровочному графику; 

k

−

 разведение исследуемого образца. 

2.

 

Хромогенный метод 

В  присутствии  тканевого  фактора  (TF)  и  ионов  Ca

2+

  происходит 

активация  фактора  VII  (образование  FVIIa).  Комплекс  FVIIa,  TF,  Ca

2+

  и 

фосфолипида  активирует  фактор  X.  Активированный  фактор  X  (FXa) 
селективно  расщепляет  хромогенный  субстрат  FXa-1  метоксикарбонил-D-
циклогексилаланил-глицил-L-аргинин-

n

-нитроанилид-ацетат  с  образованием 

п

-нитроанилина. Исследование образца проводят фотометрическим методом 

Предыдущая <  | 3142  | > Следующая  | Главная  | pharma-14@mail.ru |  pharmacopeia.ru | Скачать в PDF