Фармакопея | pharmacopeia.ru | Том 2

при 405 нм. Значение оптической плотности (или увеличение поглощения)
пропорционально количеству фактора VII.

Определение фактора VII хромогенным методом осуществляют с

помощью  специальных  тестовых  наборов.  Анализ  выполняется  в
соответствии  с  инструкцией  к  набору.  Стандартный  образец  и  препарат
предварительно  разводят  плазмой,  дефицитной  по  фактору  VII,  до
концентрации  ~  1  МЕ/мл  (основное  разведение).  Из  основного  разведения
готовят с помощью буферного раствора 3 разведения стандартного образца и
3  разведения  препарата  трис-солевым  буфером  рН  7,3  –  8,0  с  добавлением
0,1%  человеческого  или  бычьего  альбумина.  Каждое  разведение
стандартного  образца  определяют  двухкратно,  полученные  значения
используют для  построения калибровочного графика. Испытуемые образцы
определяют трехкратно.

Испытания проводят в ручном режиме с использованием пластиковых

пробирок или микропланшет при температуре (37±0,5)°C или в
автоматическом режиме с использованием коагулометра.

В лунки микропланшет вносят разведения испытуемого препарата или

стандартного образца, добавляют кальций-тромбопластиновую смесь,
раствор фактора Х и инкубируют при температуре (37± 0,5 )°C от 2 до 5 мин,
после чего вносят раствор хромогенного субстрата фактора Ха.

Измеряют изменение оптической плотности при длине волны 405 нм

либо в кинетическом режиме, либо прерывают реакцию гидролиза через 3

−

15 мин добавлением 20% (о/о) раствора уксусной кислоты ледяной и
измеряют оптическую плотность.

Фактор VIII

Клоттинговый метод

Определение активности фактора VIII проводят с использованием

человеческой плазмы, дефицитной по фактору VIII. Источником
фосфолипидов, необходимых для осуществления свертывания, является
АЧТВ-реагент.