background image

разведения  для  построения  калибровочной  зависимости  в  диапазоне  0  – 
2 МЕ/мл. После разведения определение следует провести в течение 30 мин. 

 

 
Ход определения 

Определение в пробирках 
200 мкл разбавленного  стандартного,  контрольного  или исследуемого 

образца вносят в пробирки, инкубируют в течение 3-4 мин при температуре 
37

о

С,  прибавляют  50  мкл  предварительно  прогретого  реактива  факторов, 

инкубируют в течение 2-4 мин при температуре 37

о

С и прибавляют 50 мкл 

раствора хромогена. 

Определение в микропланшетах 
В лунки микропланшета вносят по 50 мкл разбавленного стандартного, 

контрольного или исследуемого образца, инкубируют в течение 3-4 мин при 
37°С,  прибавляют  50  мкл  предварительно  прогретого  реактива  факторов, 
инкубируют в течение 2-4 мин при температуре 37

о

С и прибавляют 50 мкл 

раствора хромогена. 

Кинетический метод определения 
После прибавления раствора хромогена в течение 2 

 10 мин измеряют 

изменение оптической плотности раствора при 405 нм.  

Определение по конечной точке 
После  прибавления  раствора  хромогена  смесь  продолжают 

инкубировать  при  температуре  37

о

С  в  течение  2 

  10  мин,  после  чего  для 

остановки  реакции  прибавляют  50  мкл  20%  уксусной  или  2%  лимонной 
кислоты.  Измеряют  оптическую  плотность  раствора  против  буфера  при 
405 нм. 

Расчеты 

Строят  зависимость  изменения  оптической  плотности  в  минуту  (для 

кинетического  метода)  или  оптической  плотности  (для  определения  по 
конечной  точке)  разведений  стандартного  раствора  от  концентрации  в  них 

Предыдущая <  | 3147  | > Следующая  | Главная  | pharma-14@mail.ru |  pharmacopeia.ru | Скачать в PDF