Фармакопея | pharmacopeia.ru | Том 2

и инкубируют с определенным количеством комплемента морских свинок
(20 СН

); затем добавляют сенсибилизированные эритроциты барана и

определяют количество несвязавшегося комплемента.

Подготовка 5% суспензии эритроцитов барана. Эритроциты барана

отделяют

центрифугированием

соответствующего

объема

стабилизированной крови барана в течение 5 мин при 3000 об/мин (1000 g).
Осадок  эритроцитов  промывают  не  менее  трех  раз  10-кратным  (к  объему
эритроцитов)  объемом  буферного  раствора  до  получения  бесцветной
промывной жидкости. Отбирают определенный объем отмытых эритроцитов
и  смешивают  с  рассчитанным  количеством  буферного  раствора  для
получения 5% суспензии (о/о).

Плотность клеточной суспензии определяют следующим образом:

0,2 мл полученной суспензии эритроцитов прибавляют к 2,8 мл воды
очищенной, перемешивают, центрифугируют полученный раствор в течение
5 мин при 3000 об/мин и измеряют оптическую плотность раствора на
спектрофотометре при длине волны 541 нм в кювете с толщиной слоя 10 мм
(раствор сравнения – вода очищенная). Суспензия пригодна для испытания,
если измеренная оптическая плотность супернатанта составляет 0,62±0,01.

Корректируют плотность суспензии до указанного показателя

добавлением необходимого количества отмытых эритроцитов, если
оптическая плотность ниже 0,61, либо рассчитанным по формуле (1)
количеством буферного раствора, если оптическая плотность выше 0,63:

БР

= (V

∙А/0,62)–V

где: V

БР

– добавочный объем буферного раствора, мл;

– начальный объем суспензии, мл;

А – значение оптической плотности исходной суспензии;

0,62 – целевое значение оптической плотности.

Титрование гемолитической сыворотки

Готовят серию разведений гемолитической сыворотки, в соответствии

с табл.1 (значения разведений гемолитической сыворотки могут быть
изменены).