Фармакопея | pharmacopeia.ru | Том 2

Таблица 1 - Порядок приготовления разведений гемолитической сыворотки

Разведение

гемолитической

сыворотки

Используемые растворы

Объем буферного

раствора, мл

Гемолитическая сыворотка

Разведение

Объем, мл

1:50

4,9

Без разведения

0,1

1:100

1,0

1:50

1,0

1:250

4,0

1:50

1,0

1:500

2,0

1:250

2,0

1:1000

2,0

1:500

2,0

1:2000

1,5

1:1000

1,5

1:3000

2,0

1:1000

1,0

1:4000

1,0

1:2000

1,0

Далее из каждой пробирки с полученными разведениями

гемолитической сыворотки переносят по 1,0 мл в новые пробирки,
добавляют по 1,0 мл 5% суспензии эритроцитов и осторожно перемешивают.
Пробы инкубируют при температуре 37±0,5

С в течение 30 мин.

По окончании инкубации по 0,2 мл каждой из этих инкубированных

проб переносят в новые пробирки, прибавляют по 1,1 мл буферного раствора
и по 0,2 мл предварительно приготовленного раствора комплемента
(например, разведение 1:150). Испытание выполняют в двух повторностях.

Для приготовления контрольных проб без гемолиза в три пробирки

вносят по 1,4 мл буферного раствора и по 0,1 мл 5% суспензии эритроцитов.

Для приготовления контрольных проб с полным гемолизом в три

пробирки вносят по 1,4 мл воды очищенной и по 0,1 мл 5% суспензии
эритроцитов.

Пробы инкубируют в термостате при температуре 37±0,5

С в течение

60 мин, затем охлаждают 10 мин при температуре 5±3

С и центрифугируют

при 3000 об/мин в течение 5 мин.

Определяют оптическую плотность надосадочной жидкости на

спектрофотометре в кювете с толщиной слоя 10 мм при длине волны 541 нм.