Затем в каждую пробирку (пробирки 1-12 и пробирки с контрольными 

пробами)  добавляют  по  0,2  мл  гемолитической  системы,  тщательно 
перемешивают  и  инкубируют  в  термостате  при  температуре  37±0,5

°

С  в 

течение  60  мин,  затем  охлаждают  10  мин  при  температуре  5±3

°

С  и 

центрифугируют при 3000 об/мин в течение 5 мин. 

Измеряют  оптическую  плотность  надосадочной  жидкости  на 

спектрофотометре в кювете с толщиной слоя 10 мм при длине волны 541 нм. 
Раствор сравнения – буферный раствор.

 

Рассчитывают степень гемолиза (Y) 

по  формуле  (3)  и  строят  график  аналогично,  как  указано  в  разделе 
«Титрование комплемента». 

Если центрифугирование и/или считывание результатов не может быть 

проведено немедленно, пробы хранят при температуре 5±3

˚

С не более 1 ч. 

Учет и интерпретация результатов

 

Вычисляют по формуле (4) активность комплемента в гемолитических 

единицах  (CH

50

/мл)  для  испытуемого  образца  иммуноглобулина, 

контрольных  образцов  (положительный  и  отрицательный  контроли)  и 
контроля комплемента. 

Антикомплементарную 

активность 

испытуемого 

образца 

иммуноглобулина  (в  %)  и  контрольных  образцов  (положительный  и 
отрицательный  контроли)  вычисляют  относительно  АКА  в  контроле 
комплемента, принятой за 100%, по формуле (6): 

АКА

=

b−a

b

∙

100 %

 ,   

где:  b – активность  комплемента  (СН

50

/мл)  в  контроле  комплемента, 

рассчитанная по формуле (4);  

a – активность  комплемента  (СН

50

/мл)  в  испытуемом  образце 

иммуноглобулина  и  в  контрольных  образцах  (положительный  и 

отрицательный контроли), рассчитанная по формуле (4). 

 

Антикомплементарную 

активность 

испытуемого 

образца 

иммуноглобулина в СН

50

/мг белка рассчитывают по формуле (7): 

Предыдущая <  | 3179  | > Следующая  | Главная  | pharma-14@mail.ru |  pharmacopeia.ru | Скачать в PDF