background image

остановки  гемолиза  отобранные  пробирки  помещают  в  холодильник  на  10 
минут при температуре 2-8

0

С. После охлаждения пробирки центрифугируют в 

течение 5 мин при 1500 об/мин. Надосадочную жидкость из каждой пробирки 
быстро  и  осторожно  отбирают  в  чистые  сухие  пробирки  и  определяют 
оптическую  плотность  при  длине  волны  400  нм,  используя  кюветы  с 
толщиной  слоя  1  мм.  Раствором  сравнения  служит  0,9%  раствор  натрия 
хлорида. Оптическая плотность, соответствующая 50% гемолизу эритроцитов, 
должна быть равна 0,35±0,05. 

Аналогичным образом определяют оптическую плотность надосадочной 

жидкости  в  пробирках  контрольного  ряда,  содержащих  разведения  СО 
антиальфастафилолизина.  При  оптимальных  условиях  опыта  50%  гемолиз 
эритроцитов  и  величина  оптической  плотности,  равная  0,35±0,05, 
регистрируются 

в 

пробирке, 

содержащей 

0,1 

МЕ 

СО 

антиальфастафилолизина,  т.е.  расчетная  доза  Lh/10  точно  соответствует  её 
истинному  значению.  В  этом  случае  пробирка  опытного  ряда,  в  которой 
зарегистрирован  гемолиз  50%  эритроцитов,  содержит  0,1  МЕ 
антиальфастафилолизина в объеме 0,5 мл, что соответствует содержанию 0,2 
МЕ  в  мл.  Для  расчета  содержания  антиальфастафилолизина  в  1,0  мл 
неразведенного  исследуемого  образца,  необходимо  0,2  МЕ  умножить  на 
величину  разведения  в  данной  пробирке.  Например,  первая  пробирка,  в 
которой  надосадочная  жидкость  имеет  величину  оптической  плотности 
0,35±0,05,  содержит  препарат  в  разведении  1:100;  следовательно,  1  мл 
неразведенного препарата содержит 0,2 МЕ∙100=20 МЕ. 

В  результате  влияния  различных  факторов  возможно  несоответствие 

дозы  токсина,  используемой  в  опыте,  получаемому  расчетному  значению.  В 
таких случаях при расчете специфической активности испытуемых препаратов 
применяется  коэффициент  пересчета  (К),  определяемый  для  каждого 
конкретного анализа по формуле:  

К = а/0,1,  

где:  а  –  концентрация (количество МЕ) СО антиальфастафилолизина в 

Предыдущая <  | 3190  | > Следующая  | Главная  | pharma-14@mail.ru |  pharmacopeia.ru | Скачать в PDF