от линии старта. С меньшей скоростью, чем альбумины, в электрическом
поле перемещаются α1-, α2- и β-глобулины.
Электрофорез на пленках из ацетата целлюлозы
На увлажнённую плёнку из ацетата целлюлозы размером 90х90 мм,
заправленную в специальную рамку (трафарет), наносят 2-4 мкл
исследуемых образцов (5 образцов в 2-х параллельных определениях) и для
идентификации контрольный образец – сыворотку для контроля качества
электрофоретического разделения белковых фракций. Определение проводят
в 2-х параллельных определениях. Предварительно в электродные секции
камеры (аппарат для электрофореза на плёнках из ацетата целлюлозы)
наливают барбиталовый буферный раствор (рН 8,4). Вместо барбиталового
буферного раствора можно использовать любой подходящий коммерческий
буферный раствор с указанным значением рН.
Рамку с пленкой из ацетата целлюлозы помещают в разделительную
камеру прибора для электрофореза, закрывают крышкой, включают источник
питания (сила тока 8-10 мА, напряжение 100-129 В). Разделение проводят в
течение 30-40 мин. После проведения электрофореза снимают крышку
разделительной камеры, не допуская попадания конденсационной воды на
пленку. Рамку с плёнкой извлекают из камеры, избегая контакта с участками,
где происходил электрофорез испытуемых образцов. Пленку достают из
рамки пинцетом и дают подсохнуть на воздухе. Затем плёнку обрезают с
обоих концов (около 2,5 мм), помещают в кювету с 50 мл раствора красителя
и выдерживают в течение не более 5 мин (контакт с красителем в течение
более длительного времени может деформировать плёнку). Плёнку
вынимают из кюветы и после стекания избыточной жидкости помещают на 5
мин поочерёдно в 3 кюветы, со 100 мл отмывочной жидкости (для ускорения
процесса отмывки кювету покачивают). После отмывки фон плёнки должен
приобрести бледно-голубое окрашивание или стать почти прозрачным. Далее
плёнку тщательно промывают водой, помещают между листами
фильтровальной бумаги и слегка промокают.
Предыдущая < | 3194 | > Следующая | Главная | pharma-14@mail.ru | pharmacopeia.ru | Скачать в PDF