background image

Идентификацию  белковых  фракций  проводят  путём  сравнения 

электрофореграммы  испытуемых  образцов  с  электрофореграммой 
контрольной  сыворотки  для  контроля  качества  электрофоретического 
разделения белковых фракций. Сыворотка должна разделиться не менее, чем 
на 5 фракций в следующей последовательности от линии старта: альбумин, 
α1-  и  α2-глобулины,  β-глобулин  и  γ-глобулин.  После  проведения 
электрофореза 

проводят 

количественное 

определение 

фракций 

иммуноглобулина  путём  извлечения  краски  из  плёнки  элюирующим 
раствором с последующим колориметрированием или путём денситометрии 
электрофореграмм. 

Количественное определение фракций иммуноглобулина 

Колориметрическое определение

. Извлечение краски каждой фракции 

проводят  в  3  мл  элюирующего  раствора  с  2-х  параллельных 
электрофореграмм.  Элюцию  проводят  в  течение  40  мин  при  многократном 
встряхивании.  Оптическую  плотность  полученного  элюата  измеряют  на 
спектрофотометре при длине волны 620 нм в кюветах с толщиной слоя 10 мм 
по отношению к элюату неокрашенного участка электрофореграммы. Сумму 
оптических  плотностей  всех  белковых  фракций  принимают  за  100%  и 
рассчитывают  процентное  содержание  каждой  фракции  препарата 
иммуноглобулина. 

Денситометрическое определение. 

Электрофореграммы исследуемых 

образцов  высушивают  между  листами  фильтровальной  бумаги  в 
полиэтиленовом  пакете  (такие  условия  высушивания  исключают 
деформацию  плёнки).  Высушенные  плёнки  просветляют  вазелиновым 
маслом, пропитывая их таким образом, чтобы в плёнке не остались пузырьки 
воздуха.  Для  этого  плёнку  следует  держать  горизонтально  и  нижней 
поверхностью  осторожно  касаться  масла.  Избыток  вазелинового  масла 
удаляют, промокая плёнку между листами фильтровальной бумаги. 

Фракции  иммуноглобулина  записываются  денситометром  в  виде 

пиков.  Величина  площади  каждого  пика  пропорциональна  количеству 

3195