Фармакопея | pharmacopeia.ru | Том 2

спектрофотометрическим методом путем измерения величины поглощения при
260 нм. Величина поглощения раствора двойной кольцевой ДНК в концентра-
ции  50  мкг/мл  составляет  1  (удельное  поглощение  200).  Содержание  ДНК  в
концентрации менее 500 нг/мл определяется после инкубирования с флуорес-
центным красителем, который избирательно связывается с двойной кольцевой
ДНК  и  использованием  стандартного  образца  ДНК  для  построения  калибро-
вочной кривой. Для определения плазмидной ДНК также может быть исполь-
зована жидкостная хроматография с применением стандартного образца. В не-
которых случаях используется капиллярный электрофорез.

Должно быть указано допустимое содержание плазмиды в суперскручен-

ной конформации (предпочтительно – более 80 %). Для количественного опре-
деления суперскрученных форм может быть использована высокоэффективная
анионообменная  жидкостная  хроматография  или  капиллярный  электрофорез.
Капиллярный электрофорез также пригоден для количественного определения
других  форм.  Для  вирусного  вектора  должна  быть  указана  концентрация  ин-
фекционных  частиц.  Испытания  проводят  в  соответствии  с  ОФС  «Высокоэф-
фективная жидкостная хроматография» и «Капиллярный электрофорез».

Подлинность.

Испытания проводят с использованием стандартных об-

разцов с помощью:  рестриктазного анализа  (если его возможности  позволяют
выявить  возможные  критические  модификации  в  плазмиде  и  подтвердить  ее
подлинность),  полимеразной  цепной  реакции,  секвенированием  нуклеотидной
последовательности  плазмиды/вектора.  Выбор  методов  оценки  подлинности
должен быть обоснован и указан в фармакопейной статье или нормативной до-
кументации  на  субстанцию  или  при  установлении  требований  к  конечному
балку. Если на одной производственной площадке производят различные ДНК
вакцины, метод оценки подлинности должен быть способен однозначно иден-
тифицировать  каждую  производимую  плазмиду/вектор  в  присутствии  осталь-
ных.

Специфическая активность

. Оценивается эффективность трансфекции

in vitro

по транскрипции/трансляции кодируемых генов или in vivo по иммуно-