background image

возможные  критические  модификации  в  плазмиде  и  подтвердить  ее  подлин-
ность),  полимеразной  цепной  реакции,  секвенированием  нуклеотидной  после-
довательности плазмиды/вектора. Выбор методов оценки подлинности должен 
быть обоснован и указан в фармакопейной статье или нормативной документа-
ции  на  препарат.  Если  на одной производственной  площадке производят раз-
личные ДНК вакцины, метод оценки подлинности должен быть способен одно-
значно  идентифицировать  каждую  производимую  плазмиду/вектор  в  присут-
ствии остальных. 

Концентрация  вектора,  его  форма. 

Концентрация  ДНК  должна  быть 

выше 500 нг/мл и может быть определена путем измерения величины поглоще-
ния при длине волны 260 нм. Величина поглощения раствора двойной кольце-
вой ДНК в концентрации 50 мкг/мл составляет 1 (удельное поглощение 200). 

Содержание  ДНК  в  концентрации  менее  500  нг/мл  определяется  после 

инкубирования с флуоресцентным красителем, который избирательно связыва-
ется  с двойной кольцевой  ДНК  и использованием  стандартного образца  ДНК 
для  построения  калибровочного  графика.  Для  определения  плазмидной  ДНК 
также  может  быть  использована  жидкостная  хроматография  с  применением 
стандартного  образца.  В  некоторых  случаях  используется  капиллярный  элек-
трофорез.  

Должно быть указано допустимое количественное содержание плазмиды 

в  суперскрученной  конформации.  Для  количественного  определения  су-
перскрученных форм может быть использована высокоэффективная анионооб-
менная жидкостная хроматография или капиллярный электрофорез. Испытания 
проводят в соответствии с ОФС «Высокоэффективная жидкостная хроматогра-
фия» и «Капиллярный электрофорез». 

Капиллярный электрофорез также пригоден для количественного опреде-

ления других форм. Для вирусного вектора должна быть указана концентрация 
инфекционных  частиц.  Могут  быть  использованы  иные  критерии,  если  пред-
ставлены доказательства того, что они позволяют предсказать иммуногенность 
или другую биологическую активность. 

2669