background image

(5,0±0,5) % СО

2

. Затем в каждую лунку с ИП и соответствующим СО вносят 

вирусную суспензию, содержащую рассчитанную заранее дозу индикаторно-
го вируса 

 100 ТЦД

50

. В лунки контроля клеток вносят такой же объем под-

держивающей среды. 

Определение дозы вируса-индикатора 

Определение дозы индикаторного вируса начинают с установления его 

активности. 

Для определения активности вируса-индикатора готовят десятикратные 

разведения вируса в поддерживающей среде (от 10

-1

 до   10

-8

). Из лунок 96-

луночного планшета с клеточным монослоем удаляют ростовую среду. После 
этого вносят в лунки планшета, используемые для определения дозы вируса, 
поддерживающую среду в объеме, равном объему испытуемого образца. За-
тем вносят приготовленные разведения индикаторного вируса (не менее, чем 
по 4 лунки на каждое разведение) в объеме, равном объему внесенной до это-
го  поддерживающей  среды.  96-луночный  планшет  с  разведениями  вируса 
инкубируют  в  течение  24-48 ч  при  температуре  (37±1) 

0

С  в  атмосфере  с 

(5,0±0,5) % СО

2

. За титр (активность) вируса принимают величину, обратную 

разведению вируса, при котором клеточный монослой в 50 % лунок оказался 
полностью пораженным цитопатическим действием. Титр вируса выражают 
в тканевых цитопатических дозах – ТЦД

50

/мл. 

Активность вируса вычисляют методом Спирмена-Кербера по форму-

ле:

 

 −

+

=

2

lg

max

50

n

p

n

d

D

ED

,

 

где:

 

Lg ED

50

 – десятичный логарифм титра вируса; 

D

max 

–  десятичный  логарифм  разведения,  ниже  которого  произошла 

100 % гибель клеток (+); 

 десятичный логарифм интервала между разведениями (=1,0); 

 число лунок, приходящееся на каждое разведение вируса (=4); 

2744