Фармакопея | pharmacopeia.ru | Том 1

выдерживают при комнатной температуре в течение 10 мин. Прибавляют 0,1
мл  72  %  раствора  трихлоруксусной  кислоты  и  перемешивают  на  вихревой
мешалке. Осадок отделяют центрифугированием в течение 30 мин при 3000
g.  Осторожно  удаляют  надосадочную  жидкость,  оставшийся  осадок
растворяют в 1 мл щелочного реактива меди. Далее поступают, как описано
выше в методе Б.

При построении калибровочного графика стандартные растворы белка

следует обрабатывать аналогичным способом.

В качестве раствора сравнения используют пробу, содержащую 0,1 мл

0,1 М раствора натрия гидроксида, 0,9 мл воды, 5,0 мл реактива В и 0,5 мл
разбавленного в 2 раза реактива Фолина.

Примечания

Приготовление 0,15 % раствора натрия дезоксихолата.

В мерную

колбу вместимостью 100 мл помещают 0,15 г натрия дезоксихолата и

растворяют в воде. Объем раствора доводят до метки водой и тщательно

перемешивают.

2. Приготовление 72 % раствора трихлоруксусной

кислоты.

В мерную

колбу вместимостью 500 мл помещают 360 г трихлоруксусной

кислоты и

растворяют в воде. Объем раствора доводят до метки водой и тщательно

перемешивают.

Срок годности 72 % раствора трихлоруксусной кислоты 1 мес.

Метод 3 (Метод Бредфорд, колориметрический)

Данный метод основан на смещении максимума поглощения

оптической  плотности  красителя  кислотного  синего  90  (Кумасси
бриллиантовый синий R-250) от 470 нм до 595 нм, наблюдаемой вследствие
связывания  белка  с  красителем.  Краситель  наиболее  активно  связывается  с
остатками аргинина и лизина белка, что может приводить к погрешности при
количественном определении различных видов белков. Белок, используемый
в  качестве  стандартного  образца,  должен  быть  таким  же,  как  испытуемый
белок.

Существует относительно небольшое влияние интерферирующих

веществ, которого можно избежать, не используя детергенты и амфолиты в