Фармакопея | pharmacopeia.ru | Том 1

испытуемом образце. Сильнощелочные образцы могут взаимодействовать с
кислотным реактивом.

Стандартные растворы

. Растворяют соответствующий стандартный

образец  белка  в  буферном  растворе,  указанном  в  фармакопейной  статье.
Части  полученного  раствора  разводят  в  том  же  буферном  растворе  для
получения  не  менее  чем  пяти  стандартных  растворов,  имеющих
концентрации  белка,  равномерно  распределенные  в  интервале  между  0,1
мг/мл и 1 мг/мл.

Испытуемый раствор

. Готовят раствор испытуемого лекарственного

средства в буферном растворе, указанном в фармакопейной статье, с
концентрацией белка, находящейся в пределах интервала концентраций
калибровочного графика.

Контрольный раствор.

Используют буферный раствор, применяемый

для приготовления стандартных и испытуемого растворов.

Методика

. Прибавляют 5 мл реактива Бредфорд к 0,1 мл каждого

стандартного  раствора,  испытуемого  раствора  и  контрольного  раствора.
Тщательно  перемешивают,  переворачивая.  Избегают  образование  пены,
приводящей  к  плохой  воспроизводимости.  Выдерживают  при  комнатной
температуре  в  течение  10  мин  и  измеряют  оптические  плотности
стандартных растворов  и испытуемого раствором на спектрофотометре при
длине  волны  595  нм,  используя  контрольный  раствор  в  качестве  раствора
сравнения, содержащего растворитель и реактив Бредфорд. При определении
не  следует  использовать  кварцевые  спектрофотометрические  кюветы,
поскольку  краситель  связывается  с  этими  материалами.  Окраска  остается
стабильной в течение 1 ч.

Зависимость оптической плотности от концентрации белка носит

нелинейный  характер,  тем  не  менее,  если  интервал  концентраций,
используемых  для  построения  калибровочного  графика,  небольшой,  то  она
приближается  к  линейной.  Строят  зависимости  оптических  плотностей
стандартных  растворов  от  концентраций  белка  и  используют  линейную