Фармакопея | pharmacopeia.ru | Том 1

от природы белка, белок стандартного образца должен быть тот же, что и в
испытуемом образце.

Стандартные растворы

. Соответствующий стандартный образец

белка растворяют в буферном растворе, указанном в фармакопейной статье.
Части  полученного  раствора  разводят  в  том  же  буферном  растворе  для
получения  не  менее  чем  пяти  стандартных  растворов,  имеющих
концентрации  белка,  равномерно  распределенные  в  интервале  между  10
мкг/мл и 1200 мкг/мл.

Испытуемый раствор

. Готовят раствор испытуемого лекарственного

средства в буферном растворе, указанном в фармакопейной статье, с
концентрацией белка, находящейся в пределах интервала концентраций
калибровочного графика.

Контрольный раствор.

Используют буферный раствор, применяемый

для приготовления стандартных и испытуемого растворов.

Методика

. Прибавляют к 0,1 мл каждого стандартного раствора,

испытуемого  раствора  и  контрольного  раствора  2,0  мл  реактива  медно-
бицинхониновой кислоты. Растворы выдерживают при температуре 37 ºС в
течение  30  мин,  засекают  время  и  охлаждают  смесь  до  комнатной
температуры. Через 60 мин после окончания инкубации при 37 ºС измеряют
оптические  плотности  стандартных  растворов  и  испытуемого  раствора  на
спектрофотометре при длине волны 562 нм в кварцевых кюветах, используя
контрольный раствор в качестве раствора сравнения.

Зависимость оптической плотности от концентрации белка носит

нелинейный  характер,  тем  не  менее,  если  интервал  концентраций,
используемых  для  построения  калибровочного  графика,  небольшой,  то  она
приближается  к  линейной.  Строят  зависимости  оптических  плотностей
стандартных  растворов  от  концентраций  белка  и  используют  линейную
регрессию  для  построения  калибровочной  кривой.  На  основании
калибровочной  кривой  и  оптической  плотности  испытуемого  раствора
определяют концентрацию белка в испытуемом растворе.