Фармакопея | pharmacopeia.ru | Том 1

Примечания:

Приготовление реактива

бицинхониновой кислоты

. В мерную колбу

вместимостью 1 л помещают 10 г динатриевой соли бицинхониновой

кислоты, 20 г натрия карбоната моногидрата, 1,6 г натрия тартрата, 4 г

натрия гидроксида, 9,5 г натрия гидрокарбоната, растворяют в воде. При

необходимости значение рН полученного раствора доводят до 11,25

раствором натрия гидроксида 10 % или натрия гидрокарбоната 5 %. Доводят

объем раствора водой до метки и перемешивают.

Приготовление реактива медно- бицинхониновой кислоты.

Смешивают 1,0 мл 4 % раствора меди сульфата (40 г/л) и 50,0 мл реактива

бицинхониновой кислоты.

Метод 5 (Колориметрический метод с биуретовым реактивом)

Метод основан на взаимодействии ионов двухвалентной меди с

пептидными связями молекулы белка в щелочной среде с образованием
окрашенного комплекса, оптическая плотность которого измеряется при
длине волны 540 нм. Этот метод показывает минимальные различия между
равными количествами иммуноглобулиновых и альбуминовых белков.

Метод не рекомендован для проведения реакции в растворах,

содержащих  соли  аммония,  а  также  для  мутных  или  образующих  осадок
растворов. Для устранения влияния мешающих веществ проводят осаждение
белка  из  раствора  испытуемого  образца  следующим  образом:  к  1  объему
раствора  испытуемого  образца  прибавляют  0,1  объем  50  %  раствора
трихлоруксусной  кислоты,  перемешивают  на    вихревой  мешалке  и
выдерживают  при    комнатной  температуре  в  течение  10  мин,
центрифугируют  при  3000  g  в  течение  30  мин.  Удаляют  надосадочную
жидкость и растворяют осадок в небольшом объеме  0,5 М раствора натрия
гидроксида.  Полученный  раствор  используют  для  приготовления
испытуемого раствора.

При построении калибровочного графика стандартные растворы белка

следует обрабатывать аналогичным способом.

Стандартные растворы.

Если иное не указано в фармакопейной

статье, растворяют соответствующий стандартный образец белка в 0,9 %