background image

2.1.2. Метод В. Определение биологической активности инсулина по 

снижению концентрации глюкозы в крови мышей. 

В опыт берут не менее 40 мышей одного пола массой не менее 20,0 г. 

Животных  рандомизируют  по  массе  на  4  группы  не  менее  10  животных  в 
каждой.  

Внутри группы каждую особь  нумеруют по порядку. Во время опыта 

животным должен быть обеспечен свободный доступ к корму и воде.  

Непосредственно  перед  экспериментом  из  основных  растворов  СО  и 

ИО  готовят  по  два  рабочих  раствора  (Примечания  1,  2).  Рекомендуемые 
концентрации  рабочих  растворов,  например  для  самок,  могут  находиться  в 
диапазоне  0,06  –  3,0  МЕ/мл.  При  испытании  некоторых  аналогов  инсулина 
возможно  использование  более  низких  концентраций  рабочий  растворов. 
Например, 0,03-0,06 МЕ/мл. 

Согласно  схеме  двойного  перекреста  (Таблица),  мышам  первой  и 

второй группы подкожно в холку вводят по 0,1 мл/10 г массы тела животного 
рабочие  растворы  СО,  а  третьей  и  четвертой  -  такие  же  объёмы  рабочих 
растворов  ИО.  Рабочие  растворы  последовательно  вводят  каждому 
животному, в соответствии с нумерацией, через каждые 15 - 20 с. Интервал 
между  введениями  рабочих  растворов  каждой  группе  животных  должен 
составлять 1-2 мин.  

Вторую  постановку  теста  (перекрест)  проводят  через  24  ч  после 

первой.  

После  инъекции  инсулина  через  40  ±  1  мин  последовательно  в 

соответствии с номером каждого животного внутри группы из орбитального 
венозного  синуса  глаза  с  помощью  стерильного  гепаринизированного 
капилляра  берут  около  50  мкл  крови  в  микроцентрифужные  пробирки 
объемом 0,5 мл. Необходимо соблюдать те же временные интервалы, что и 
при  введении  растворов.  Определение  концентрации  глюкозы  в  крови 
животных проводят согласно разделу 4. 

1123