фермента осуществляется экспериментально при помощи построения кривой
зависимости начальной скорости реакции от концентрации фермента (рис. 3).
После выбора начальной концентрации фермента необходимо
проверить, сохраняется ли при ней линейная зависимость [
P
] от
t
при
выбранном значении насыщающей концентрации субстрата.
Рисунок 3 – Зависимость начальной скорости реакции
υ
0
от начальной концентрации фермента [
E
]
0
4. Температура.
Особенностью ферментативных реакций является
наличие колоколообразной зависимости скорости реакции от температуры в
достаточно широком интервале температур, которая характеризуется
«температурным оптимумом» реакции. Эта особенность объясняется
наложением 2 эффектов: возрастанием скорости реакции при увеличении
температуры и ускорением тепловой денатурации белковой молекулы,
приводящей к инактивации фермента при достаточно высоких температурах.
Обычно ферментативную реакцию рекомендуется проводить в термостате
при температуре (37 ± 0,1) ºС, если нет иных указаний в фармакопейной
статье. Предварительно каждый из реагентов нагревают до температуры
37 ºС.
5. Значение рН.
Типичная кривая, описывающая для большинства
ферментов рН-зависимость начальной скорости ферментативной реакции при
υ
o
[
E
]
0
Предыдущая < | 1330 | > Следующая | Главная | pharma-14@mail.ru | pharmacopeia.ru | Скачать в PDF