Фармакопея | pharmacopeia.ru | Том 1

веществами.

Испытуемый раствор инкубируют с моноцитами человека, например:

- с гепаринизированной периферической кровью человека, желательно,

отобранной не более, чем за 4 ч до испытания;

- с моноцит-содержащей фракцией крови, например, содержащей

мононуклеарные клетки периферической крови человека (МКПК),
выделенные путем центрифугирования в градиенте плотности или иным
способом;

- с линией моноцитоподобных клеток (моноцитов) человека.

Гепаринизированную периферическую кровь человека разводят

культуральной  средой  (%  (v/v))  или  0,9  %  раствором  натрия  хлорида  до
концентраций  от  2  до  50  %.  В  испытании  используют  МКПК  или  линии
моноцитоподобных  клеток  в  культуральной  среде  с  добавлением  плазмы
донора  или  сыворотки  крови  группы  IV  (AB)  с  концентрацией  клеток  в
суспензии 0,1-1,0 ˑ10

клеток/мл. При использовании линий моноцитоподобных

клеток сыворотку группы крови IV (АВ) можно заменить на бычью
эмбриональную сыворотку, инактивированную нагреванием. Культуру клеток
готовят при температуре 37 ± 1°С в увлажненной атмосфере с 5% С0

Культура клеток, используемая для выделения маркеров ПВ, должна быть

функционально  стабильной.  Реакцию  выделенного  маркера  сравнивают  с
реакциями  на  стандартный  эндотоксин  или  на  серию  ЛС,  утвержденную  в
качестве  контрольной.  Реакцию  выбранного  маркера  калибруют  с
использованием соответствующего стандарта.

ПОДГОТОВКА К ИСПЫТАНИЯМ

Стеклянная и пластиковая посуда, используемая в испытании не должна

содержать  пирогенных  веществ,  в  количествах,  определяемых  в  тесте,  и  не
оказывать  влияние  на  ход  реакции.  Всю  стеклянную  посуду  и  другую
аппаратуру,  устойчивую  к  нагреванию,  депирогенизируют  в  сухожаровом
шкафу  при  температуре  250°С  не  менее  30  мин  в  соответствии  с
валидированной процедурой.