Капиллярный изотахофорез

– Напряжение

. В капиллярном изоэлектрическом фокусировании

используется очень высокое электрическое поле – от 300 до 1000 В/см на
этапе фокусирования.

– Капилляр

. Электроосмотический поток должен быть уменьшен или

полностью подавлен. Для уменьшения электроосмотического потока
используют капилляры с модифицированной внутренней поверхностью.

– Растворы

. Анодный флакон заполняется буферным раствором с рН

ниже, чем p

наиболее кислого амфолита, а катодный флакон заполняется

раствором с рН выше, чем p

наиболее щелочного амфолита. Обычно для

анода используется фосфорная кислота, а для катода – натрия гидроксид.

Добавление в раствор амфолита полимера, такого как метилцеллюлоза,

ведет к подавлению конвекции и электроосмотического потока при
увеличении вязкости. Широкие диапазоны рН используются для оценки
изоэлектрической точки, в то время как более узкие диапазоны применяются
для улучшения точности.

Осаждение белков в их изоэлектрической точке во время этапа

фокусирования предотвращают в случае необходимости с помощью таких
буферных добавок, как глицерин, поверхностно-активные вещества,
мочевина или цвиттерионные буферные соли.

Капиллярный изотахофорез

Изотахофорез – это метод разделения, который проводится в режиме

поддержания постоянства тока (все разделенные зоны движутся с одной
скоростью). При этом должно обеспечиваться постоянное отношение между
концентрацией и подвижностью ионов в каждой зоне.

В капиллярном изотахофорезе применяются два буферных раствора,

между  которыми  находятся  зоны  аналита.  Например,  для  анализа  анионов
буфер  должен  быть  выбран  таким  образом,  чтобы  ведущий  электролит
содержал  анион  с  фактической  подвижностью,  превышающей  характерную
для  разделяемых  веществ.  Аналогично  ион  завершающего  электролита
должен  иметь  меньшую  подвижность,  чем  подвижность  разделяемых