background image

Величина рH образца и концентрирующих слоев выбирается так, чтобы быть 
приблизительно  на  3  единицы  ниже,  чем  верхнее  значение

 

p

K

a

  глицина. 

Поэтому, на пересечении этих слоев только около 0,1% глициновых молекул 
имеют  отрицательный  заряд.  Таким  образом,  быстродвижущиеся  хлорид-
ионы  постепенно  замещаются  ионами  глицина,  которые  при  рН  6,8  в 
концентрирующем  геле  нейтрализуются  и  перестают  участвовать  в 
проведении  тока.  Сопротивление  верхней  части  концентрирующего  геля 
резко  возрастает,  а  вместе  с  ним  возрастает  и  напряженность  поля. 
Локализованные  зоны  высоковольтового  градиента  между  передним  и 
задним  ионными  фронтами  вызывают  относительно  высокую  скорость 
миграции  белков  в  концентрирующем  геле,  которая  не  ограничивается 
благодаря крупнопористой структуре этого геля. 

На границе концентрирующего и разделяющего гелей белки достигают 

высокоплотных  слоев  геля  и  замедляются  из-за  уменьшающегося  размера 
пор  разделяющего  геля.  Более  высокое  значение  pH,  с  которым  фронт 
электродного  буферного  раствора  встречается  в  разделяющем  геле,  также 
заставляет глицинат мигрировать быстрее, и напряженность поля падает, что 
также  снижает  скорость  движения  белков.  Таким  образом,  происходит 
концентрирование  пробы  и  все  компоненты  образца,  независимо  от 
первоначальной  высоты  столбика  пробы  в  лунке,  входят  в  нижний  гель 
практически  одновременно  в  виде  узкой  зоны  с  высокой  концентрацией 
белка.  

В  мелкопористом  разделяющем  геле  начинается  процесс  медленной 

миграции  белков  и  их  фракционирования  в  зависимости  от  молекулярных 
масс,  а  то  обстоятельство,  что  процесс  разделения  начинается  с  узкой 
исходной зоны, обеспечивает высокую разрешающую способность системы 
вцелом. 

Оборудование 

Прибор для электрофореза состоит из: 
1)  источника  постоянного  тока  с  регулируемым  напряжением  и  со 

Предыдущая <  | 655  | > Следующая  | Главная  | pharma-14@mail.ru |  pharmacopeia.ru | Скачать в PDF