Электрофорез в геле с неоднородной буферной системой

буферной системе, которая описывается ниже.

Электрофорез в геле с неоднородной буферной системой

(диск

электрофорез)

Метод диск-электрофореза, благодаря своей высокой разрешающей

способности, рекомендуется для характеристики смесей белков и для
обнаружения примесей, которые могут иметь подвижность, близкую к
подвижности главного компонента.

Метод подразумевает использование прерывистой системы, состоящей

из двух отличных гелей: разделяющего (нижнего) геля и концентрирующего
(верхнего)  геля.  Эти  два  геля  имеют  различную  пористость  (верхний  –
крупнопористый, нижний – мелкопористый). Кроме степени пористости, эти
два  геля  резко  различаются  по  рН  и  молярности  буферов,  в  которых  они
полимеризуются.  Пористость,  длина  и  тип  буфера  для  нижнего  геля
определяются  точно  такими  же  соображениями,  что  и  для  простого
непрерывного электрофореза.

Отличительной особенностью данного вида электрофореза является

обязательное использование в составе электродного буферного раствора
подвижных ионов, мигрирующих в том же направлении, что и белки;
например, применение иона Cl

для щелочных буферных растворов или иона

– для кислых. В этом буферном растворе подвижность иона,

мигрирующего в том же направлении, что и белок, должна сильно зависеть
от рН. Для этого удобно использовать цвиттерионы: например, простые
аминокислоты (глицин и р-аланин). Их изоэлектрические точки лежат в
нейтральной области рН (для глицина р

=5,97).

Под действием электрического поля ионы глицина, входящие в состав

электродного буферного раствора, следуют за белками в концентрирующий
гель. Область перемещающихся границ быстро формируется под действием
высоко  подвижных  хлорид-ионов  во  фронте  и  относительно  медленных
замыкающих  ионов  глицина.  Хлорид-ион  из-за  его  небольшого  размера
мигрирует  быстрее,  чем  любой  из  белков,  присутствующих  в  образце.