background image

разделяющий гель, а затем сверху наслаивают концентрирующий гель. 

Приготовление разделяющего геля 

В  конической  колбе  готовят  рассчитанное  в  зависимости  от  объема 

ячейки количество раствора для разделяющего геля, содержащего требуемую 
концентрацию  акриламида,  используя  значения,  приведенные  в  Таблице  1. 
Смешивают компоненты в указанном порядке. В тех случаях, где требуется, 
перед 

добавлением 

раствора 

аммония 

персульфата 

и 

тетраметилэтилендиамина (TEMED) раствор фильтруют, и, если необходимо, 
дегазируют раствор через мембрану из ацетата целлюлозы (с диаметром пор  
0,45  мкм)  под  вакуумом  при  перемешивании.  Добавляют  соответствующие 
количества раствора аммония персульфата и TEMED как указано в табл. 1, 
перемешивают  и  немедленно  заливают  в  промежуток  между  двумя 
стеклянными  пластинами  ячейки.  Оставляют  достаточное  место  для 
концентрирующего  геля  (длина  зубцов  гребенки  плюс  1  см).  Используя 
суженную стеклянную пипетку, тщательно наслаивают на гель сверху воду 
или изобутанол. Оставляют гель в вертикальном положении при комнатной 
температуре до завершения полимеризации. 

Приготовление концентрирующего геля 

После  окончания  полимеризации  воду  или  изобутанол  сливают  и 

промывают верхнюю часть геля несколько раз водой, чтобы удалить остатки 
неполимеризованного  акриламида  и  изобутанола,  если  он  использовался. 
Сливают с верхней части геля так много жидкости, как только возможно и 
затем удаляют любую оставшуюся влагу фильтровальной бумагой. 

В  конической  колбе  готовят  соответствующее  количество  раствора, 

содержащего  требуемую  концентрацию  акриламида,  используя  значения, 
приведенные  в  табл.  2.  Смешивают  компоненты  в  том  же  порядке  и  с 
использованием  тех  же  приемов  фильтрации  и  дегазирования,  что  и  для 
разделяющего геля. После добавления соответствующих количеств раствора 
аммония  персульфата  и  TEMED,  как  указано  в  табл.2,  перемешивают  и 
немедленно заливают в промежуток между двумя стеклянными пластинами 

Предыдущая <  | 658  | > Следующая  | Главная  | pharma-14@mail.ru |  pharmacopeia.ru | Скачать в PDF