background image

значение  открываемости,  рассчитанное  для  определяемых  аналитов,  и 
сократить  трудозатраты.  Общие  методы,  используемые  для  удаления 
буферных компонентов из испытуемых образцов, включают следующие: (1) 
полупрепаративное  ОФ-ВЭЖХ  разделение  белка  и  компонентов  пробы, 
элюирование  белка  с  колонки  легкоиспаряющимся  элюентом,  содержащим 
достаточную  долю  органического  растворителя,  и  сушку  полученного 
образца  элюата  вакуумным  центрифугированием;  (2)  диализ  с 
использованием  буферного  раствора  на  основе  легколетучих  компонентов, 
или  воды;  (3)  центробежная  ультрафильтрация  для  замены  буфера 
легколетучим  буферным  раствором  или  водой;  (4)  осаждение  белка  из 
буфера  с  использованием  органического  растворителя  (например,  ацетона); 
(5) полупрепаративная гель-фильтрация. 
 

Внутренний стандарт 

Для  контроля  возможных  физических  и  химических  потерь,  а  также 

возможных  отклонений  во  время  аминокислотного  анализа,  рекомендуется 
использовать внутренний стандарт. Точно известное количество внутреннего 
стандарта  может  быть  добавлено  к  раствору  белка  до  гидролиза.  Значение 
открываемости  рассчитанное  для  внутреннего  стандарта  теоретически 
соответствует  общему  значению  открываемости  для  аминокислот  в 
гидролизате испытуемого образца белка. Свободные аминокислоты, однако, 
во  время  гидролиза  ведут  себя  несколько  иначе,  по  сравнению  с 
аминокислотами  в составе белка, скорости высвобождения  или  разрушения 
которых  в  ходе  гидролиза  непостоянны.  По  этой  причине  использование 
внутреннего  стандарта  для  учета  потерь  при  гидролизе  может  дать 
ненадежные  результаты,  что  необходимо  учитывать.  Внутренний  стандарт 
также может быть добавлен к смеси аминокислот после гидролиза для учета 
возможной  нестабильности  реагентов  (протекания  реакции  дериватизации), 
производных аминокислот, а также нестабильности работы прибора в целом. 

Предыдущая <  | 680  | > Следующая  | Главная  | pharma-14@mail.ru |  pharmacopeia.ru | Скачать в PDF