background image

Для  выбора  оптимальных  условий  гидролиза  в  ходе  первоначального 

анализа  белка  неизвестного  состава,  варьируют  продолжительность 
гидролиза и температуру его проведения. 

 
МЕТОД 1 

Кислотный  гидролиз  с  использованием  хлористоводородной  кислоты, 

содержащей фенол, является наиболее общей процедурой, используемой для 
гидролиза  белка/пептида  при  аминокислотном  анализе.  Добавление  фенола 
предотвращает реакцию галогенирования тирозина. 

Гидролизующий  раствор

.  6 М  кислота  хлороводородная,  содержащая  от 

0,1 % до 1,0 % фенола. 

Выполнение гидролиза

 

Гидролиз  в  жидкой  фазе

.  Образец  белка  или  пептида  помещают  в 

ампулу для гидролиза и высушивают (образец сушат  для того, чтобы вода, 
содержащаяся  в  образце,  не  разбавляла  гидролизующий  раствор). 
Прибавляют  гидролизующий  раствор  из  расчета  200 мкл  на  500 мкг 
лиофилизированного белка. Образец в ампуле замораживают в бане с сухим 
льдом  и  ацетоном  (-78 °С)  и  запаивают  ампулу  под  вакуумом  при  помощи 
пламени.  Образцы  обычно  гидролизуют  при  температуре  110 °С  в  течение 
24 ч  в  вакууме  или  в  атмосфере  инертного  газа  для  предотвращения 
окисления.  Если  есть  подозрение,  что  испытуемый  белок  полностью  не 
гидролизуется, рассматривают возможность проведения гидролиза в течение 
более продолжительного времени (например, 48 ч и 72 ч). 

Парофазный  гидролиз

.  Является  одним  из  наиболее  общих  методов 

кислотного  гидролиза.  Предпочтителен  для  микроанализа,  когда  доступны 
лишь  небольшие  количества  образца.  При  использовании  парофазного 
гидролиза  загрязнение  образца  кислотными  реактивами  минимизировано. 
Флаконы  с  высушенными  образцами  помещают  в  сосуд,  содержащий 
подходящее 

количество 

гидролизующего 

раствора 

так, 

чтобы 

гидролизующий  раствор  не  контактировал  с  испытуемым  образцом.  В 

Предыдущая <  | 684  | > Следующая  | Главная  | pharma-14@mail.ru |  pharmacopeia.ru | Скачать в PDF