Фармакопея | pharmacopeia.ru | Том 1

амперометрического детектора по току окисления между золотым рабочим
электродом и комбинированным электродом сравнения (pH/Ag/AgCl).
Развертка потенциала между рабочим электродом и электродом сравнения во
времени осуществляется по специальной программе.

Пределы обнаружения аминокислот находятся в середине

фемтомолярного – начале пикомолярного диапазона концентраций. Отклик
детектора линеен в пределах 3 порядков концентрации аминокислот.

МЕТОД 11. Определение нативных аминокислот с испарительным
детектором светорассеяния

Для разделения аминокислот используются методы ионообменной или

ион-парной  хроматографии  с  элюентами  на  основе  легколетучих
компонентов (органические кислоты и их аммонийные соли, гидрокарбонат
аммония,  аммиак  и  алкиламины,  перфорированные  органически  килоты  и
пр.).  Возможно  также  использование  жидкостной  хроматографии
гидрофобных взаимодействий (HILIC).

В ионообменном варианте аминокислоты в белковом/пептидном

гидролизате разделяются на сульфокатионообменной колонке в градиентном
режиме элюирования. В качестве компонентов подвижной фазы для создания
бинарного  градиента  по ионной  силе и  pH  используются  водные буферные
растворы  на  основе  ацетата  аммония  и  трифторуксусной  кислоты,  что
позволяет  добиться  разделения  18  протеиногенных  аминокислот  в  течение
1 часа.  Детектирование  аминокислот  выполняют  при  температуре
испарительной  трубки  детектора  70 °С  и  скорости  потока  газа-носителя
(азот)  1,5 л/мин.  Пределы  обнаружения  аминокислот  составляют  от
нескольких сотен пмоль до нескольких нмоль.

Альтернативным является использование ион-парного разделения

аминокислот на колонке, заполненной октадецилсиликагелем. В качестве
компонентов подвижной фазы для градиентного элюирования используются
водный раствор, содержащий 0,1–0,5 % трифторуксусной кислоты и 0,2–