background image

амперометрического  детектора  по  току  окисления  между  золотым  рабочим 
электродом  и  комбинированным  электродом  сравнения  (pH/Ag/AgCl). 
Развертка потенциала между рабочим электродом и электродом сравнения во 
времени осуществляется по специальной программе. 

Пределы  обнаружения  аминокислот  находятся  в  середине 

фемтомолярного  –  начале  пикомолярного  диапазона  концентраций.  Отклик 
детектора линеен в пределах 3 порядков концентрации аминокислот. 

 

МЕТОД 11.  Определение  нативных  аминокислот  с  испарительным 
детектором светорассеяния

 

Для разделения аминокислот используются методы ионообменной или 

ион-парной  хроматографии  с  элюентами  на  основе  легколетучих 
компонентов (органические кислоты и их аммонийные соли, гидрокарбонат 
аммония,  аммиак  и  алкиламины,  перфорированные  органически  килоты  и 
пр.).  Возможно  также  использование  жидкостной  хроматографии 
гидрофобных взаимодействий (HILIC). 

В  ионообменном  варианте  аминокислоты  в  белковом/пептидном 

гидролизате разделяются на сульфокатионообменной колонке в градиентном 
режиме элюирования. В качестве компонентов подвижной фазы для создания 
бинарного  градиента  по ионной  силе и  pH  используются  водные буферные 
растворы  на  основе  ацетата  аммония  и  трифторуксусной  кислоты,  что 
позволяет  добиться  разделения  18  протеиногенных  аминокислот  в  течение 
1 часа.  Детектирование  аминокислот  выполняют  при  температуре 
испарительной  трубки  детектора  70 °С  и  скорости  потока  газа-носителя 
(азот)  1,5 л/мин.  Пределы  обнаружения  аминокислот  составляют  от 
нескольких сотен пмоль до нескольких нмоль. 

Альтернативным  является  использование  ион-парного  разделения 

аминокислот  на  колонке,  заполненной  октадецилсиликагелем.  В  качестве 
компонентов подвижной фазы для градиентного элюирования используются 
водный  раствор,  содержащий  0,1–0,5 %  трифторуксусной  кислоты  и  0,2–

702