background image

типов высокоспецифического взаимодействия, например, фермент-кофактор, 
фермент-ингибитор, пептиды-специфические антитела и др.  

Существует 

несколько 

разновидностей 

метода 

аффинной 

хроматографии  таких,  например,  как  колоночная  аффинная  хроматография, 
мембранная аффинная хроматография и др.  

Колночная афинная хроматография обычно идет в 2 этапа: 1) сорбция 

определяемого вещества или группы веществ на колонки путем их реакции с 
иммобилизованным  на  носителе  лигандом;  2) промежуточная  промывка 
колонки  для  удаления  не  специфически  связанных  компонентов; 
3) десорбция исследуемого компонента смеси с колонки. Для первого этапа 
подбирают  такие  условия  (состав  буферного  раствора,  pH,  ионная  сила 
буферного  раствора,  температура  и  т.д.),  которые  являются  наиболее 
благоприятными  для  взаимодействия аффинной  пары.  После  этого  колонку 
хорошо  промывают  и  проводят  десорбцию  определяемого  вещества.  Это 
обычно  достигается  с  помощью  повышения  ионной  силы  буферного 
раствора, повышением или понижением его pH или добавлением различных 
органических растворителей или введением в буферный раствор различных 
хаотропных  агентов.  Также  можно  проводить  десорбцию  раствором 
конкурирующего лиганда. Иногда для лучшей десорбции и получения более 
качественной  хроматограммы  используют  линейный  градиент  (pH,  ионной 
силы или содержания органического растворителя). 

В мембранной аффинной хроматографии вместо колонки с сорбентом 

используется  фильтрационный  элемент,  с  иммобилизованном  на  нем 
специфическом  лиганде.  Мембранная  аффинная  хроматография  в  целом 
состоит из тех же этапов, однако специфика мембранного метода позволяет 
уменьшить  объем  сорбента,  благодаря  эффективности  сорбента  в  виде 
мембраны.  Кроме  того,  в  мембранном  варианте  резко  возрастает  скорость 
очистки  при  близкой  к  колоночной  эффективности.  Благодаря  меньшим 

928