Фармакопея | pharmacopeia.ru | Том 1

типов высокоспецифического взаимодействия, например, фермент-кофактор,
фермент-ингибитор, пептиды-специфические антитела и др.

Существует

несколько

разновидностей

метода

аффинной

хроматографии таких, например, как колоночная аффинная хроматография,
мембранная аффинная хроматография и др.

Колночная афинная хроматография обычно идет в 2 этапа: 1) сорбция

определяемого вещества или группы веществ на колонки путем их реакции с
иммобилизованным  на  носителе  лигандом;  2) промежуточная  промывка
колонки  для  удаления  не  специфически  связанных  компонентов;
3) десорбция исследуемого компонента смеси с колонки. Для первого этапа
подбирают  такие  условия  (состав  буферного  раствора,  pH,  ионная  сила
буферного  раствора,  температура  и  т.д.),  которые  являются  наиболее
благоприятными  для  взаимодействия аффинной  пары.  После  этого  колонку
хорошо  промывают  и  проводят  десорбцию  определяемого  вещества.  Это
обычно  достигается  с  помощью  повышения  ионной  силы  буферного
раствора, повышением или понижением его pH или добавлением различных
органических растворителей или введением в буферный раствор различных
хаотропных  агентов.  Также  можно  проводить  десорбцию  раствором
конкурирующего лиганда. Иногда для лучшей десорбции и получения более
качественной  хроматограммы  используют  линейный  градиент  (pH,  ионной
силы или содержания органического растворителя).

В мембранной аффинной хроматографии вместо колонки с сорбентом

используется  фильтрационный  элемент,  с  иммобилизованном  на  нем
специфическом  лиганде.  Мембранная  аффинная  хроматография  в  целом
состоит из тех же этапов, однако специфика мембранного метода позволяет
уменьшить  объем  сорбента,  благодаря  эффективности  сорбента  в  виде
мембраны.  Кроме  того,  в  мембранном  варианте  резко  возрастает  скорость
очистки  при  близкой  к  колоночной  эффективности.  Благодаря  меньшим