Фармакопея | pharmacopeia.ru | Том 2

Клеточно-бактериальную  смесь  инкубируют  в  термостате  при  температуре
(37  ±  1)  °С  в  течение  30  мин,  периодически  встряхивая.  Затем  смесь
трехкратно  отмывают  ЗФР  от  неадгезированных  микробов  при
центрифугировании (600 об/мин по 10 мин). Все манипуляции осуществляют
на  холоде.  К  полученному  после  отмывания  осадку  добавляют  1–2  капли
ЗФР  и  готовят  мазки  на  стекле.  Препараты  фиксируют  96°  спиртом  и
окрашивают по Романовскому–Гимзе.

В световом микроскопе подсчитывают среднее количество бактерий,

прилипших к 25 энтероцитам или колоноцитам.

При оценке адгезивности каждого штамма микроорганизма опыт

повторяют не менее 3 раз. Подсчитывают СПА

−

число микробов,

адгезированных к 1 клетке-энтероциту, подсчитывая среднее количество
«микроб/клетка» в 10 полях зрения и учитывая результаты всех опытов
(учитывается не менее 25 энтероцитов в 10 полях зрения).

Уровень адгезии отдельных штаммов бактерий условно разделен на 4

степени: неадгезивные штаммы (СПА = 0); слабоадгезивные (СПА = 1–5);
среднеадгезивные (СПА = 5–10) и высокоадгезивные (СПА выше 10).

3. Определение уровня адгезивной активности штаммов-пробиотиков

на модели эпителиальных клеток влагалища.

Взятие материала для

получения изолированных эпителиальных клеток производят при
проведении диагностической гистероскопии и раздельном диагностическом
выскабливании стенок шейки матки и цервикального канала при различных
неинфекционных заболеваниях тела матки.

В асептических условиях под внутривенной анестезией шейка матки

обнажается куско- или ложкообразными зеркалами. После этого производят
соскоб эпителия слизистой боковых стенок влагалища. После забора
материал помещают в транспортный контейнер с жидкой питательной средой
199. Контейнер обкладывается льдом.

Полученные клетки дважды отмывают охлажденным ЗФР (pH 7,2)

центрифугированием при 800 об/мин по 10 мин. После определения