Фармакопея | pharmacopeia.ru | Том 2

исходной концентрации взвеси клеток с помощью камеры Горяева с
помощью светового микроскопа суспензию клеток разводят до концентрации
(1,5–2)

∙

клеток/мл.

Далее готовят суспензию испытуемого штамма с концентрацией 2

∙

КОЕ/мл.

В ходе испытания 0,5 мл взвеси эпителиальных клеток смешивают с 0,5

мл  взвеси  бактериальной  культуры  указанной  концентрации.  Клеточно-
бактериальную смесь инкубируют в термостате при температуре (37 ± 1) °С в
течение  30  мин,  периодически  встряхивая.  Потом  смесь  трехкратно
отмывают  ЗФР  от  неприлипших  микробов  при  600  об/мин  по  10  мин.  Все
манипуляции осуществляют на холоде. К осадку добавляют 1–  капли ЗФР и
готовят  мазки  на  стекле.  Препараты  фиксируют  смесью  Никифорова  и
окрашивают по Романовскому-Гимзе.

В световом микроскопе подсчитывают среднее количество бактерий,

прилипших к 25 эпителиоцитам.

При оценке адгезивности каждого штамма микроорганизма опыт

повторяют не менее 3 раз. Подсчитывают СПА

−

число микробов,

адгезированных к 1 клетке-эпителиоциту, подсчитывая среднее количество
«микроб/клетка» в 10 полях зрения и учитывая результаты всех опытов
(учитывается не менее 25 эпителиоцитов в 10 полях зрения).

Степень адгезии отдельных штаммов бактерий определяют следующим

образом: неадгезивные штаммы (СПА = 0); слабоадгезивные (СПА = 1 – 5);
среднеадгезивные (СПА = 5 – 10) и высокоадгезивные (СПА выше 10).

Штаммы с высокой адгезивной активностью не следует рекомендовать

для производства пробиотиков.

Раздел 4. Определение безопасности пробиотических штаммов

Определение вирулентности, токсичности, токсигенности и

безвредности осуществляют в соответствии с ОФС «Безопасность
пробиотиков в опытах

in vivo

».