Фармакопея | pharmacopeia.ru | Том 2

градиентного элюирования, в процессе которого для каждого белка
создаются условия быстрой десорбции.

Градиентное элюирование

Величина среднего фактора ёмкости (

), характеризующего

удерживание сорбента в условиях градиентного элюирования, прямо
пропорциональна

продолжительности

градиента

обратно

пропорциональна разнице в содержании органического растворителя в
начальной

конечной

точках

градиента.

Для

получения

удовлетворительных значений

(1 ≤

≤

10) для молекул белков цитокинов

и интерферонов необходимо использовать разделение с продолжительным
временем градиента и, по возможности, с меньшей разницей в содержании
органического растворителя в начальной и конечной точках градиента. Как
правило, продолжительность градиента в большинстве методик анализа
цитокинов и интерферонов не превышает 60 мин.

Другим важным параметром является крутизна градиента –

изменение  процентного  содержания  ацетонитрила  в  подвижной  фазе  в
единицу  времени.  В  связи  с  тем,  что  в  препаратах  цитокинов  и
интерферонов наряду с основным действующим веществом содержатся, как
правило,  близкородственные  примеси,  нужно  задавать  необходимую
пологую  форму  градиента  (≈  1  %  в  мин),  которая  позволяет  обеспечить
достаточно четкое разрешение пиков для определения чистоты препарата.

Выбор подвижной фазы.

В обращённофазной хроматографии

подвижная  фаза  состоит  из  буферного  раствора  и  органического
растворителя.  При  разделении  белков  и  пептидов  в  состав  растворов
подвижной  фазы,  как  правило,  входят  разбавленные  растворы  кислот:
фосфорной,

трифторуксусной,

муравьиной,

уксусной

или

гептафтормасляной.

В качестве органического компонента подвижной фазы при анализе

белков и пептидов методом ОФ ВЭЖХ наиболее часто используется
ацетонитрил, обладающий низкой вязкостью и низким поглощением в УФ