Фармакопея | pharmacopeia.ru | Том 2

диапазоне с высоким разрешением и получением узких пиков правильной
формы.  Помимо  ацетонитрила,  в  состав  подвижной  фазы  могут  входить
метанол,  пропанол  и  изопропанол.  Детектирование  пептидов  и  белков
проводится по УФ-поглощению пептидной связи в диапазоне от 205 до 220
нм.

Выбор колонки.

Наиболее часто для анализа пептидов и белков

используются колонки с сорбентами на основе силикагеля с привитыми
лигандами в виде прямоцепочечных алкильных групп (С

, С

размером частиц не более 5 мкм), увеличение длины цепи которых
увеличивает время удерживания определяемых компонентов.

Температура колонки.

При испытании показателя подлинности

лекарственных препаратов для получения воспроизводимых результатов
времени удерживания анализируемых компонентов необходимо обеспечить
термостатирование колонки с точностью ± (0,1 – 0,2)

С.

Анализ вспомогательных веществ

Метод ОФ ВЭЖХ используется также для определения содержания в

препаратах цитокинов и интерферонов таких вспомогательных веществ, как
маннит, бензиловый спирт,

-крезол, полисорбат-80 и метионин. Все

перечисленные вещества, за исключением метионина, анализируются в
изократических условиях. Для анализа метионина используют режим
градиентного элюирования.

Для анализа всех веществ, за исключением маннита, используются

колонки, заполненные обращённофазными сорбентами С

или С

размером частиц 5 мкм и порами размером 60 – 120 Ǻ. Для определения
маннита используют колонку, заполненную силикагелем, к поверхности
которого привиты лиганды, содержащие аминогруппы.

При определении содержания маннита, полисорбата-80,

-крезола в

качестве подвижной фазы используют смеси ацетонитрила или метанола в
различной концентрации с водой. Для определения спирта бензилового
используют смесь ацетонитрила (или метанол) с ацетатным буфером (рН