Фармакопея | pharmacopeia.ru | Том 2

деионизованной водой до метки и вновь перемешивают. Далее раствор

фильтруют (условия фильтрования указывают в нормативной документации).

Раствор хранят при температуре от 2 до 8

С в емкости из темного стекла в

течение 1 мес.

2. Приготовление полиакриламидного геля. Смешивают основной 30 %

раствор акриламида со смесью амфолитов в соотношении, указанном в

нормативной документации, и осторожно перемешивают.

Подготовленный раствор акриламида с амфолитами помещают на

магнитную мешалку, прибавляют 0,25 объема 10 % раствора аммония

персульфата, 0,25 объема раствора ТЕМЕД (тетраметилендиамина) и

перемешивают. Заливают полученный раствор в подготовленную форму.

Полимеризация геля происходит в течение 30-40 мин.

Сборка формы для полиакриламидного геля

На нижнюю стеклянную пластину помещают пластиковый лист, на

него помещают прокладки (спейсеры) и сверху помещают вторую
стеклянную пластину, и всю конструкцию скрепляют зажимами.

Методика проведения изоэлектрофокусирования

Охлаждающую пластину помещают в камеру для электрофореза,

соединяют с термостатом, установленным на температуру от 8 до 10

С. На

охлаждающую пластину наносят 1,0 мл воды деионизованной или керосина.

Форму разбирают, гель на полиэфирной пленке (пластиковом листе)

переносят  на  охлаждающую  пластину  таким  образом,  чтобы  вода  касалась
всего  края  геля.  Гель  медленно  и  осторожно  помещают  на  охлаждающую
пластину, избегая появления пузырьков воздуха. Одну электродную полоску
смачивают  анодным  буферным  раствором  и  помещают  на  анодный  конец
геля  (маркировка  (+)  на  охлаждающей  пластине).  Вторую  электродную
полоску смачивают катодным буферным раствором и помещают на катодный
конец геля (маркировка (

−

) на охлаждающей пластине). Составы катодного и

анодного  буферных  растворов  приводят  в  нормативной  документации.
Аппликаторы для нанесения испытуемых и стандартных образцов помещают
на  поверхность  геля,  наносят  необходимое  количество  испытуемых  и
стандартных  образцов,  указанное  в  нормативной  документации  (при