Фармакопея | pharmacopeia.ru | Том 2

мембраны лист выдерживают 5 мин в деионизованной воде, а затем 5 мин в
буферном растворе для переноса белков (если нет иных указаний в
фармакопейной статье или нормативной документации). При использовании
PVDF-мембраны ее необходимо выдержать в растворе метанола или спирта в
течение 10-15 мин, а затем произвести аналогичные действия, что и для
нитроцеллюлозной мембраны.

Для переноса белков на нитроцеллюлозную или PVDF-мембрану

собирают  "сэндвич".  Для  этого  специальную  губку,  входящую  в  комплект
прибора для переноса белков, смачивают в буферном растворе для переноса
белков и помещают на специальную пластиковую рамку, на которую затем
помещают  от  одного  до  трех  листов  фильтровальной  бумаги  (например,
Whatman  3MM),  предварительно  обрезанных  в  соответствии  с  размером
мембраны и смоченных в растворе для переноса белков. Сверху помещают
гель, на поверхность которого аккуратно (без пузырьков воздуха) помещают
приготовленный лист нитроцеллюлозной или PVDF-мембраны. На мембрану
помещают от одного до трех листов фильтровальной бумаги, предварительно
смоченных  в  растворе  для  переноса  белков,  и  сверху  прикрывают  второй
специальной  губкой,  смоченной  в  растворе  для  переноса  белков.  Рамку
скрепляют  зажимами  и  медленно  погружают  в  прибор  для  электрофореза,
заполненный  раствором  для  переноса  белков,  лист  мембраны  должен  быть
обращен  к  аноду.  Включают  прибор.  Электрофоретический  перенос  белков
осуществляют    при    комнатной  температуре  в  течение  25  мин,  выставив
ограничение  по  току  из  расчета  A

max

= 2 мА/см

, (например, для геля

размером 10x10см

max

= 200 мА), если нет других указаний в

фармакопейной статье или нормативной документации.

Допускается использование оборудования для полусухого переноса

белков с геля на мембрану в соответствии с инструкцией по его применению.

По окончании переноса "сэндвич" разбирают. Мембрану промывают

фосфатно-солевым буферным раствором (ФСБ).