Фармакопея | pharmacopeia.ru | Том 2

оптимальная концентрация и/или титр антител определены, то используют
рекомендованное для данных антител (сыворотки) разведение.

При титровании в первую лунку ряда вносят готовое разведение

антител – в среднем 1–10 мкг на лунку, далее производят последовательное
разведение антител в лунках. Инкубацию со специфическими антителами
проводят в течение 30 мин при комнатной температуре при встряхивании на
горизонтальном шейкере для планшетов.

Отмывка осуществляется не менее 3–4 раз с помощью фосфатно-

солевого буферного раствора pH 9,0, содержащего 0,1% твин-20.

IV.

Добавление

антивидовых

(антиглобулиновых)

антител,

конъюгированных с ферментной меткой.

В качестве детекторных

(вторичных)  антител  используются  антивидовые  поликлональные  антитела,
конъюгированные с ферментативной меткой. Чаще всего используются козьи
или  кроличьи  антитела,  специфичные  к  целой  молекуле  или  к  Fc-
фрагментам специфических антител. Концентрация детекторных антител, как
правило, указывается производителем в виде разведения исходного раствора
(например, 1:1000).

Инкубация с вторичными мечеными антителами проводится в течение

30 мин при комнатной температуре при встряхивании на горизонтальном
шейкере для планшетов.

Отмывка осуществляется не менее 3–4 раз с помощью фосфатно-

солевого буферного раствора (pH 9,0), содержащего 0,1 % твин-20.

Инкубация проводится в течение 10 мин при комнатной температуре и

встряхивании на горизонтальном шейкере для планшетов.

V. Проведение ферментативной реакции, сопровождающейся

появлением окрашенного продукта.

В лунки вносят по 100 мкл раствора

субстрата  и  инкубируют  в  течение  10  мин  при  комнатной  температуре  и
постоянном  перемешивании.  Для  остановки  ферментативной  реакции
применяют  «стоп  реагент»,  который  добавляют  во  все  исследуемые  и