Фармакопея | pharmacopeia.ru | Том 2

контрольные пробы в равных количествах. Наиболее часто в качестве «стоп
реагента» применяют серную кислоту.

Прямой неконкурентный метод ИФА

Методика прямого ИФА имеет лишь небольшие отличия от методики

непрямого  неконкурентного  ИФА.  Так,  I  и  II  стадии  одинаковы  в  обоих
типах анализа. Отличие заключается в том, что в прямом варианте ИФА на
стадии  III  используют  специфические  исследуемому  антигену  антитела,
конъюгированные  с  ферментной  меткой,  и  они  прямо  взаимодействуют  с
исследуемым  веществом.  При  необходимости  также  можно  проводить
титрование  конъюгатов  аналогично  принципу,  описанному  ранее  для
неконъюгированных антител. Стадия IV в рамках прямого неконкурентного
ИФА не проводится.

«Сэндвич» метод ИФА

В данном варианте ИФА используется пара антител (первичные и

вторичные), специфичных к пространственно удаленным эпитопам
исследуемого антигена.

I. Сорбция антител на твердой фазе.

Методика сорбции антигена

аналогична методике сорбции антител в разделе «Косвенный
неконкурентный метод ИФА».

II. Блокировка.

Методика блокировки мест неспецифического

связывания на подложке (твердой фазе) аналогична методике блокировки,
описанной в разделе «Косвенный неконкурентный метод ИФА».

III. Инкубация с антигеном.

В лунки планшета с преадсорбированными

антителами  вносят  по  50  мкл  исследуемого  вещества  и  стандартных
разведений антигена, если нет других указаний в фармакопейной статье или
нормативной  документации.  Разведения  антигена  должны  быть
приготовлены  на  основе  фосфатно-солевого  буферного  раствора  (pH  9,0),
содержащего  0,1  %  твин-20,  поскольку  твин-20  снижает  неспецифическое
связывание белковых молекул друг с другом и с поверхностью планшета. И