Фармакопея | pharmacopeia.ru | Том 2

исследуемое вещество, и стандартные разведения антигена вносят попарно в
соседние в горизонтальном ряду лунки (либо по 3 повторности), используя
по 2 (3) лунки на каждое разведение белка.

Инкубацию проводят при комнатной температуре в течение 30 мин при

постоянном перемешивании. Отмывка осуществляется не менее 3–4 раз
фосфатно-солевым буферным раствором (pH 9,0), содержащим 0,1 % твин-
20,

или другим буферным раствором, указанным в фармакопейной статье или

нормативной документации.

IV. Инкубация с антителами, конъюгированными с ферментной

меткой.

В лунки планшета вносят по 100 мкл раствора специфических

антител, конъюгированных с ферментной меткой. Оптимальная
концентрация конъюгированных антител, как правило, указывается в
фармакопейной статье или нормативной документации (обычно используют
концентрацию 2–4 мкг/мл).

Инкубация с антителами, содержащими ферментную метку, проводится

в течение 30 мин при комнатной температуре при встряхивании на
горизонтальном шейкере для планшетов.

Отмывка осуществляется не менее 3–4 раз с помощью фосфатно-

солевого  буферного  раствора  (pH  9,0),  содержащего  0,1  %  твин-20,  или
другим  буферным  раствором,  указанным  в  фармакопейной  статье  или
нормативной документации.

V. Проведение ферментативной реакции, сопровождающейся

появлением окрашенного продукта.

Методика проведения ферментативной

реакции аналогична методике, описанной в разделе: «Косвенный
неконкурентный метод ИФА».

Детекция

Как было указано выше, для детекции используются меченные

ферментной меткой или другим реагентом антитела. В качестве ферментной
метки могут выступать, например, пероксидаза хрена, щелочная фосфатаза
или галактозидаза. В качестве детектора могут быть использованы антитела