Фармакопея | pharmacopeia.ru | Том 2

анализируемого  белка,  оценки  стабильности  клеточных  систем  экспрессии,
используемых  для  получения  продуктов  рекомбинантных  ДНК  и  оценки
согласованности процесса в целом — в отношении как оценки стабильности
продукта,  так  и  обеспечения  идентичности  белка,  либо  определения
содержания протеинов с изменениями в структуре.

Составление пептидных карт может рассматриваться как метод

получения «отпечатков пальцев» белка и представляет собой получаемую в
результате

ряда

химических

процессов

полную

расшифровку

анализируемого белка. Метод включает четыре принципиальные стадии:
выделение и очистка белка (или «подготовка белка к гидролизу») — в случае,
если белок входит в состав какой-либо смеси; избирательное расщепление
пептидных

связей

(гидролиз);

хроматографическое

разделение

образующихся пептидных фрагментов; анализ и идентификация пептидов.

Анализируемый образец подвергается расщеплению и анализу

параллельно  со  стандартным  образцом.  Полное  расщепление  пептидных
связей  более  вероятно  при  использовании  ферментов,  таких  как
эндопептидазы  (например,  трипсин),  а  не  химических  гидролизующих
реагентов.  Для  того,  чтобы  карта  была  информативной,  она  должна
содержать  достаточное  количество  пептидов.  С  другой  стороны,  в  случае,
если  пептидных  фрагментов  будет  слишком  много,  карта  может  утратить
свою  специфичность,  поскольку  у  многих  белков  может  оказаться
аналогичный профиль.

Пептидное картирование не является общим методом, а заключается в

составлении индивидуальных карт для каждого отдельного белка.

Методики испытания должны быть приведены в фармакопейной статье

или нормативной документации на субстанции или лекарственную форму.

ПОДГОТОВКА БЕЛКА К ГИДРОЛИЗУ
Подготовка белка к гидролизу включает этапы подготовки белка к

расщеплению (восстановление, денатурацию, алкилирование и пр.)
выделение и очистку белка от вспомогательных соединений.